沉默FEN1增强CDDP对胃癌SGC-7901细胞化疗的敏感性

发布时间：2017-10-15 15:15

  本文关键词：沉默FEN1增强CDDP对胃癌SGC-7901细胞化疗的敏感性

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【摘要】：背景：瓣状核酸内切酶1(FEN1)在DNA复制和修复中起关键作用,许多研究证实其表达水平与癌症的发展和预后相关。本课题组前期研究发现FEN1的表达水平与胃癌患者的预后及发展相关；同时发现下调FEN1,可抑制胃癌SGC-7901细胞的生长和促进细胞凋亡,意味着FEN1可能会成为治疗胃癌的潜在靶点。而且,已有研究表明FEN1的抑制剂可增强DNA烷化剂化疗的敏感性。这些结果提示了FEN1可能会成为增强DNA烷化剂等化疗药临床治疗的一个有效靶点。然而,关于FEN1与CDDP之间的具体关系,还缺乏更深层次的研究。本课题拟在前期工作基础上,进一步研究FEN1是否可作为增强CDDP对胃癌SGC-7901细胞化疗敏感性的靶点,为FEN1作为胃癌个性化、靶向性治疗的新靶点提供实验依据和理论支持。目的：探讨利用RNA干扰技术特异性沉默胃癌SGC-7901细胞的FEN1对CDDP化疗敏感性的影响。方法：1.以CDDP作为诱导剂诱导FEN1的表达,通过Western-blot验证FEN1的表达水平,探讨CDDP是否可诱导FEN1的表达上调。2.使用实验前期成功构建的特异性FEN1-siRNA靶向序列：NC-siRNA及未转染组(Untransfected组)作为对照组,Western-blot方法检测转染胃癌SGC-7901细胞后的FEN1蛋白表达以期检测抑制率。3.MTT法分别检测FEN1-siRNA+CDDP实验组、NC-siRNA+CDDP及Untransfected+CDDP组对照组胃癌SGC-7901细胞的生长增殖活性。即在不同的实验分组中分别予以不同浓度CDDP和10μM CDDP予以不同时间间隔处理。4.利用流式细胞术(FCM)检测FEN1-siRNA+CDDP联合组、NC-siRNA+CDDP处理组及Untransfected+CDDP处理组的胃癌SGC-7901细胞株的细胞凋亡率变化；同时利用Western Blot方法检测各组Bcl-2、 Bcl-xl和Bax的蛋白表达水平变化。结果：1. Western Blot结果显示FEN1的蛋白表达水平随着CDDP的浓度增加(0,10,20,30,40,50 μMCDDP处理48 h)及时间延长(30μ M CDDP处理时间为24 h,48 h和72 h)而呈依赖性增加(P0.05)。2. Western-blot方法检测结果显示,试验组FEN1-siRNA组细胞中的FEN1的蛋白表达明显低于NC-siRNA及Untransfected两个对照组(P0.05)。3.MTT法结果显示FEN1-siRNA+CDDP联合组的胃癌SGC-7901细胞株在不同的CDDP浓度(0,2.5,5,10,20,30,40和50μM)和10μMCDDP予以不同时间(24 h,48和72 h)处理的条件下,其细胞生存率均明显低于NC-siRNA+CDDP及Untransfected+CDDP两个对照组(P0.05)。4.流式检测结果显示,FEN1-siRNA+CDDP联合组的胃癌SGC-7901细胞的细胞凋亡率显著高于NC-siRNA+CDDP及Untransfected+CDDP两个对照组(P0.05)。同时,Western-blot方法结果显示,在FEN1-siRNA+CDDP联合组中,其Bcl-2及Bcl-xl的蛋白表达水平明显低于对照组；相反,Bax蛋白表达水平明显高于对照组(P0.05)。结论：在CDDP的诱导条件下,FENl的蛋白表达水平显著地被上调,即FEN1上调蛋白表达水平与CDDP呈明显的剂量-时间依赖关系。在CDDP的处理下,沉默FEN1可明显降低胃癌SGC-7901细胞生存率及增加细胞凋亡率。同时,在FEN1-siRNA+CDDP试验组中,其Bcl-2及Bcl-xl的蛋白表达水平明显降低；而Bax的蛋白表达水平明显升高。因此,本研究提供了一种潜在的可能的抗胃癌化疗靶点的机制：沉默FEN1可能增强CDDP对SGC-7901细胞治疗的敏感性。
【关键词】：FEN1 胃癌 siRNA CDDP 敏感性
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 1. 材料与方法14-22
• 3. 结果22-28
• 4. 讨论28-32
• 全文总结32-33
• 参考文献33-38
• 文献综述38-49
• 参考文献43-49
• 致谢49-50
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文50

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