miR-200c对乳腺癌BT549细胞迁移及Slug表达的作用

发布时间：2017-10-15 15:39

  本文关键词：miR-200c对乳腺癌BT549细胞迁移及Slug表达的作用

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【摘要】：乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,我国乳腺癌发病率占全身各种恶性肿瘤的7%~10%,部分大城市报告乳腺癌已占女性恶性肿瘤之首。根据2011年St Gallen乳腺癌分子分型共识,利用分子标志物雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)和人类上皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor,Her2),将乳腺癌分为luminal A型、luminal B型、Her-2型和basal-like型,其中basal-like型乳腺癌不表达ER、PR和Her2,侵袭性强,对内分泌和分子治疗无效。Snail是第一个被发现也是最重要的E-钙粘连蛋白转录抑制因子,E-钙粘连蛋白又与上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)密切相关。mi R则是近几年发现的转录后调控蛋白表达的小分子RNA。本研究通过基因分析与预测发现mi R-200c可以与Snail超家族中的Snail2(Slug)结合,且已有研究表明mi R-200超家族在胶质母细胞瘤和前列腺癌细胞中,通过调控Slug基因,提升E-钙粘连蛋白表达,进而抑制EMT、阻滞细胞迁移。然而,mi R-200c在basal-like型乳腺癌细胞中是否与Slug具有相关性,是否通过抑制Slug进而提升E-钙粘连蛋白的表达,降低EMT的发生,目前还尚未见相关报道。目的本研究以basal-like型乳腺癌细胞株BT549为研究对象,将mi R-200c转染进入BT549细胞,探讨mi R-200c与Slug基因表达的关系,以及mi R-200c对BT549细胞迁移的影响,以期为临床诊断与治疗提供实验室依据。方法1、研究对象及分组:用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养BT549细胞(细胞购自ATCC细胞库),置于37℃、5%CO2培养箱中培养,取对数生长期细胞接种于6孔板,每孔接种1×105个细胞。实验分3组:mi R-200c组(转染mi R-200c)、mi R-control组(转染空质粒)和对照组(未转染质粒),每组设3个复孔。2、利用Transwell迁移试验和划痕试验,研究mi R-200c对乳腺癌BT549细胞迁移能力的影响;3、利用Real time PCR方法,检测mi R-200c对乳腺癌BT549细胞Slug和E-钙粘连蛋白m RNA的表达变化情况;4、利用Western blot方法,检测mi R-200c对乳腺癌BT549细胞Slug蛋白的表达变化情况。结果1、与对照组和mi R-control组比较,mi R-200c组BT549细胞的迁移能力下降,差异具有统计学意义(P=0.000);2、与对照组和mi R-control组比较,mi R-200c组BT549细胞中Slug m RNA表达降低,差异具有统计学意义(P=0.002),而E-钙粘连蛋白m RNA表达升高,差异具有统计学意义(P=0.004)。3、与对照组和mi R-control组比较,mi R-200c组BT549细胞中Slug蛋白表达量下降,差异具有统计学意义(P=0.000)。结论mi R-200c对basal-like型乳腺癌BT549细胞中的Slug基因表达具有下调作用,进而上调E-钙粘连蛋白的表达,是抑制乳腺癌上皮间质转化和阻滞细胞迁移的重要因素之一。
【关键词】：miR-200c Slug E-钙粘连蛋白 乳腺癌 BT549
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 中英文缩略词对照表10-11
• 1 引言11-15
• 2 材料与方法15-29
• 3 结果29-32
• 4 讨论32-37
• 5 结论37-38
• 6 创新点38-39
• 7 总结与展望39-40
• 参考文献40-43
• 综述43-59
• 参考文献54-59
• 个人简介及攻读硕士学位期间发表的文章59-61
• 致谢61

【参考文献】

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1 Binhua P.Zhou;;Epithelial-mesenchymal transition in breast cancer progression and metastasis[J];癌症;2011年09期

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本文编号：1037954