ITGA2 C807T多态性与大肠腺瘤及大肠癌发病风险的相关性

发布时间：2017-10-18 18:01

  本文关键词：ITGA2 C807T多态性与大肠腺瘤及大肠癌发病风险的相关性

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【摘要】：背景目的大肠癌是人类最常见的消化道恶性肿瘤,也是世界上导致癌症死亡的第三大原因。随着我国人民生活水平不断提高和饮食习惯的改变,我国大肠癌的发病率呈现上升趋势,已跃居第3-5位。自1978年Morson提出大肠癌遵循腺瘤-腺癌的组织发生顺序以来,众多研究表明,大肠从正常粘膜到腺瘤,再发展为进展期大肠癌,为遗传因素与环境因素交互作用导致的多步骤、多阶段的复杂进展过程。环境因素主要包括不良饮食习惯(营养膳食结构不合理：高脂肪、高蛋白、高热量、低纤维素等)、吸烟、环境致癌因素等,但并非暴露于以上环境因素的所有人群均患病,这提示大肠肿瘤的发生存在一定的遗传易感性,而其中单核苷酸多态性是决定遗传易感性的主要遗传因素。因此,在大肠肿瘤病因学研究中,探讨与其相关的易感基因显得尤其重要。单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)是基因组的变异源,是DNA单个碱基突变,是人类基因组遗传多态性(占人类多态性的90%)最简单的形式和最常见的来源。在人类基因组中平均约每1000个碱基对中就有一个SNP, SNP在群体中频率不小于1%,在人体对疾病的易感性与抵抗力、疾病临床表现多样性以及不同个体对药物反应差异性等方面发挥作用。其中非同义SNPs(nsSNPs),也称为错义变异尤为重要,因为它们可以导致翻译的氨基酸残基序列改变。nsSNPs可能在人群中编码的蛋白质的功能多样性方面发挥了重要作用,且与多种疾病有关。nsSNPs可能通过降低蛋白质溶解度或使蛋白质结构不稳定来影响蛋白质功能,可能通过改变转录和翻译来影响基因调节。众多流行病学研究显示,基因多态性可能与中国人群患大肠肿瘤的风险密切相关。整联蛋白是细胞表面的异二聚体蛋白家族里的一个成员,它调节着细胞与细胞外基质、细胞与细胞之间的相互作用。目前已知在哺乳动物中至少有由18种α亚基(α1～α11、αD、αE、αL、αM、αV、αX、αIIb)口8种β亚基(β1～β8)非共价结合形成的25种整联蛋白异二聚体,每一对组合形成的整联蛋白都特异性的结合唯一的一组配体。有研究报道整联蛋白在肿瘤形成和肿瘤转移中起着重要的作用,尤其是α2β1,αIIβ3和αVβ3被认为是肿瘤发生和进展的关键因子。整联蛋白α2β1也被称为血小板糖蛋白Ia-IIa (GPIa-IIa),它几乎表达于所有上皮细胞,并且其在肿瘤细胞中的表达水平和肿瘤细胞的运动能力,侵袭力和细胞分化相关。除此之外,几项研究还发现整联蛋白α2β1与大肠上皮的分化、大肠癌细胞的增殖、侵袭和转移密切相关。人类整联蛋白α2亚单位基因(ITGA2)位于染色体5q23-31。在该基因编码区的第7个外显子上807位核苷酸发现一个C到T的同义突变。有研究证明该单核苷酸多态性TTGA2 C807T (NCBI SNP ID:rs1 126643)影响着整联蛋白α2β1的表达量(α2亚单位只和β1亚单位结合),TT基因型者整联蛋白α2β1表达最高,CT基因型者整联蛋白α2β1表达次之,CC基因型者整联蛋白α2β1表达最低。最近的研究表明,ITGA2基因C807T多态性和各种疾病都密切相关,包括乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胃癌、缺血性脑卒中、视网膜静脉闭塞、急性冠脉综合症。然而,据我们所知,目前国内尚无评估该多态性与大肠腺瘤及大肠癌发病风险的研究。而既往研究表明,整联蛋白α2β1的表达量和功能改变参与了大肠癌的发生发展和转移,因此我们进行了一项以医院为基础的基于中国江西汉族人群的病例-对照研究,以了解ITGA2 C807T基因多态性与大肠腺瘤及大肠癌患病风险的相关性。方法1.研究对象：本研究为基于医院人群的病例-对照研究,对象为232例个体,包括95例正常对照个体、48例新近组织病理学确诊为大肠腺瘤的患者和89例新近组织病理学确诊为大肠癌的患者,其中大肠癌患者未合并同时和/或异时性其他恶性肿瘤,且未接受化疗或放疗；对照组为同时期就诊的健康人或无肿瘤、无遗传病史的患者。病例组和对照组均为无血缘关系的萍乡及周边地区的汉族人群。2.收集受试者资料和血样：本研究需获得萍乡市人民医院伦理委员会的批准和受试者的知情同意,采集外周静脉血2ml,保存于-80℃低温待用。通过问卷调查收集受试者的大肠癌家族史、住址(农村或城市)、年龄、性别、体重、吸烟、饮酒、饮茶情况等信息。现吸烟或曾吸烟平均每天吸烟一支以上并持续2年以上者被定义为吸烟个体,现饮酒或曾饮酒平均每天1次以上并持续3个月以上者被定义为饮酒个体,现饮茶或曾饮茶平均每天2次以上并持续3个月以上者被定义为饮茶个体,家族中1名以上亲属和/或2名以上二级亲属患大肠癌者被定义为大肠癌家族史阳性。根据国际抗癌联盟和美国癌症联合会联合制定的第7版肿瘤TNM分期法评定肿瘤侵犯深度和局部淋巴结转移状态。分化等级依据世界卫生组织标准(WHO)确定。3.抽提血液白细胞DNA：采用人全血基因组DNA快速提取试剂盒,操作方法严格按照说明书进行。4.采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism assay, PCR-RFLP)检测ITGA2 C807T基因型。PCR反应体系为20μl,其中包括2μl10×PCR buffer,1.75 mmol/LMgCl2, 0.15mmol/L dNTPs,0.25μmol/L上下游引物,F:5'-GTGTTTAACTTGAACACAT AT-3', R:5'-AccTTGCATATTGAATTGCTT-3',lu Taq DNA聚合酶和150 ng模板DNA。 PCR扩增程序为：95℃预变性5 min,然后经35个循环：包括94℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸60 s,最后72℃延伸5 min。115 bp的扩增产物用限制性内切酶Taq I 65 ℃水浴酶切12 h后,经3%琼脂糖凝胶电泳,使用紫外分析仪观察电泳结果,并用数码相机对电泳结果进行拍照作为半定量评估方法。5.质量控制：随机抽取10%样本进行重复实验,结果要求100%一致。6.统计学分析：采用SPSS 16.0统计软件进行分析,统计检测均基于双尾,P值小于0.05定义为有统计学意义。如果定量资料是偏态分布,则用Mann-Whitney秩和检验检测两组间的差异。采用拟合优度χ2检验检测Hardy-Weinberg平衡。采用Pearson X2检验比较病例组和对照组中的基因型和分类变量分布的差异。用优势比(odds ratio, OR)及其95%可信区间(confidence interval, CI)评估基因多态性与大肠腺瘤及大肠癌的风险。用非条件Logistic回归法计算经年龄、性别、吸烟饮酒饮茶状态、高血压史、糖尿病史和大肠癌家族史等校正的OR值。7.评价ITGA2基因多态性与大肠腺瘤及大肠癌遗传易感性关系。1)研究对象一般特征分析；2)ITGA2基因型分布与大肠腺瘤及大肠癌风险评估；3)ITGA2多态性与大肠腺瘤及大肠癌风险分层分析：4)ITGA2多态性和大肠癌的临床病理特征分析。结果1.野生型CC纯合子基因型有92和23 bp两个片段；突变型TT纯合子仅有115 bp一个片段；CT杂合子基因型有115、92和23 bp三个片段。2.病例组和对照组在性别上无统计学差异,大肠腺瘤组和对照组在和年龄(5岁以内)上无统计学差异,大肠癌组年龄稍大,提示配对基本成功。病例组和对照组的糖尿病史、饮酒、饮茶和婚姻状况无统计学差异。大肠癌组体质量、身高和BMI较对照组低。病例组和对照组在高血压史、大肠癌家族史、教育程度、职业、居住地上的差异具有统计学意义。大肠腺瘤组和对照组的吸烟状况差异具有统计学意义。3.ITGA2 C807T基因型频率和等位基因频率在大肠腺瘤组和对照组的总体分布无显著差异,而其在大肠癌组和对照组的分布具有显著差异。相比于野生基因型CC,携带变异基因型(CT+TT)的个体患大肠腺瘤和大肠癌的风险均增高。4.在分层分析中,变异基因型并未增加患大肠腺瘤的风险,而变异基因型增加患大肠癌的风险在女性、吸烟、饮酒、高学历、脑力劳动、城市受试者中具有统计学意义。没有发现此多态性与大肠癌风险相关性的年龄差异。5.大肠癌病例分别按病变部位、病理类型、肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移和Dukes分期等临床病理特征分层后,均未见ITGA2 C807T位点基因型分布存在显著性差异(P0.05)。结论1.携带T等位基因的基因型(CT与TT)可能增加患大肠腺瘤和大肠腺癌的发病风险。2.ITGA2 C807T基因多态性可能与女性、吸烟、饮酒、高学历、脑力劳动、城市受试者患大肠癌的风险相关,即携带T等位基因可能增加上述个体大肠腺癌的发病风险。3.ITGA2 C807T基因多态性在大肠癌患者的临床病理特征分层分析中未见显著性差异。
【关键词】：ITGA2 基因多态性 大肠腺瘤 大肠癌
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.34
【目录】：

• 摘要3-8
• ABSTRACT8-15
• 第一章 前言15-19
• 第二章 材料与方法19-26
• 2.1 试剂与材料19-20
• 2.2 主要仪器与设备20-21
• 2.3 研究对象21
• 2.4 研究方法21-26
• 第三章 结果26-33
• 3.1 研究对象一般特征26-28
• 3.2 ITGA2 C807T基因型检测结果28
• 3.3 ITGA2 C807T基因型分布和大肠腺瘤、大肠癌风险估计28-29
• 3.4 ITGA2 C807T多态性和大肠腺瘤、大肠癌风险分层分析29-32
• 3.5 ITGA2 C807T多态性和大肠癌的临床病理特征32-33
• 第四章 讨论33-37
• 第五章 全文总结37-38
• 第六章 参考文献38-45
• 综述45-63
• 参考文献55-63
• 攻读学位期间成果63-64
• 致谢64-66

【参考文献】

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1 郑树,刘希永,曹江,Rebecca A.Nelson,董琦,方永明,William Bennett,蔡善荣,张苏展;代谢酶NAT2多态性与大肠息肉及腺瘤的复发[J];中华医学杂志;2001年15期

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本文编号：1056336