新城疫病毒D90毒株抑制人胃癌BGC-823细胞的体内外研究

发布时间：2017-10-18 23:48

  本文关键词：新城疫病毒D90毒株抑制人胃癌BGC-823细胞的体内外研究

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【摘要】：胃癌是发展中国家主要的消化系统恶性肿瘤之一，也是世界范围内最常见的因癌症导致死亡的肿瘤之一。通常，，对于合并有散播或者转移病变的患者，外科手术或系统化疗带来的生存优势是有限的。目前研究认为，利用病毒进行溶瘤治疗是一种很有前途的肿瘤治疗方式。许多病毒被发现具有溶瘤作用。例如腺病毒、狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒、单纯疱疹病毒、甲型流感病毒、麻疹病毒和新城疫病毒。新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）是一种重要的溶瘤病毒。NDV是一种家禽病毒，属副粘液病毒，对禽类具有高度的致病性，可以引起禽类的新城疫，被认为是重要的溶瘤病毒之一。NDV可有选择性地在肿瘤细胞中增殖并起到特异杀伤作用，不能在人正常细胞中复制，只能在特定肿瘤细胞中增殖。除了轻微的流感样症状和结膜炎，对人基本无致病性，具有较好的安全性。某些临床试验证明鸡新城疫病毒是一种高效、安全的治疗肿瘤的试剂。目前研究可用于治疗人类肿瘤的NDV包括MTH68/H、PV-701、73-T和HUJ。NDV-D90毒株是新分离得到的新城疫病毒，对癌细胞具有快速、高效杀伤的能力。 本研究通过检测NDV-D90病毒在BGC-823细胞上清中的效价，分析NDV-D90在胃癌BGC-823细胞内的扩增能力。检测不同MOI值的NDV-D90对人胃癌BGC-823细胞株的细胞毒性分析NDV-D90毒株对胃癌BGC-823细胞生长的影响和MOI的变化对BGC-823细胞杀伤能力的变化。利用流式细胞术，分析NDV-D90对胃癌BGC-823细胞凋亡的作用影响。肿瘤细胞侵袭实验分析NDV-D90抑制胃癌BGC-823细胞侵袭转移的能力。用慢病毒载体GV260构建一株带有荧光素酶标记的BGC-823细胞，命名为BGC-823-luci。用细胞毒性实验比较分析NDV-D90对BGC-823和BGC-823-luci的杀伤能力的差异。用BGC-823-luci细胞构建裸鼠胃癌移植瘤模型。实验组移植瘤注射NDV-D90，对照组移植瘤注射PBS，利用发光分子成像技术评价分析实验组和对照组荧光信号。取实验组和对照肿瘤组织，用HE染色分析裸鼠体内的肿瘤坏死情况。结果显示NDV-D90在人胃癌BGC-823细胞的增殖能力很强，在感染后为60h时最大值达到1010TCID50/0.1ml。NDV-D90对人胃癌BGC-823细胞具有很强的细胞毒作用，最大杀伤率达到80%以上且MOI越高，细胞的死亡率越高，细胞死亡出现的也越快。流式细胞术结果显示NDV-D90在MOI为1感染时间为72h时，细胞的死亡率最大，达到79%，细胞凋亡随着感染时间的增长和MOI值的增大而加快。胃癌移植瘤体内实验结果发现注射NDV移植瘤的体积明显小于对照组。小动物活体成像也显示注射病毒肿瘤组织的体积和荧光信号明显小于注射PBS肿瘤体积。 HE染色结果显示实验组肿瘤组织出现大面积坏死，对照组生长状态良好。NDV-DN90对胃癌BGC-823细胞在体内外都有很好的抑制作用，可能成为一种溶瘤制剂。
【关键词】：新城疫病毒D90毒株 胃癌BGC-823细胞系 凋亡 坏死
【学位授予单位】：黑龙江八一农垦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 符号说明8-12
• 第一章 引言12-22
• 1.1 胃癌的治疗现状12-13
• 1.2 溶瘤病毒的种类13-15
• 1.3 新城疫病毒及新城疫病毒的结构15-16
• 1.4 新城疫病毒治疗肿瘤的研究进展16-17
• 1.5 新城疫病毒抑制肿瘤的种类17-18
• 1.6 新城疫病毒溶瘤作用的机制18-19
• 1.7 可见光活体成像技术19-20
• 1.8 研究的目的及意义20-22
• 第二章 NDV-D90 对 BGC-823 细胞抑制作用的体外实验22-38
• 2.1 材料22-23
• 2.1.1 病毒、细胞22
• 2.1.2 主要试剂22
• 2.1.3 主要的试剂和药品22-23
• 2.2 实验方法23-28
• 2.2.1 鸡胚扩繁 NDV-D90 病毒23
• 2.2.2 细胞培养23
• 2.2.3 NDV-D90 致 BGC-823 细胞病变23
• 2.2.4 病毒含量的测定23-24
• 2.2.5 病毒在 BGC-823 细胞中的增殖能力分析24
• 2.2.6 NDV-D90 对 BGC-823 细胞的毒性检测24
• 2.2.7 肿瘤细胞侵袭实验24-25
• 2.2.8 流式细胞术25-26
• 2.2.9 构建带有荧光素酶标记的 BGC-823 稳定细胞株26-27
• 2.2.10 体外细胞成像实验27-28
• 2.2.11 NDV-D90 对 BGC-823 细胞和 BGC-823-luci 细胞的细胞毒性实验28
• 2.3 结果28-35
• 2.3.1 BGC-823 细胞病变28-29
• 2.3.2 病毒含量测定29
• 2.3.3 细胞毒性检测29-30
• 2.3.4 细胞侵袭实验30-31
• 2.3.5 流式细胞术31-33
• 2.3.6 构建荧光素酶标记的 BGC-823 细胞系33
• 2.3.7 体外细胞成像实验33-34
• 2.3.8 比较 NDV-D90 对 BGC-823 细胞系和 BGC-823-luci 细胞系的细胞毒性34-35
• 2.4 讨论35-38
• 第三章 NDV-D90 对 BGC-823 细胞抑制作用的体内实验38-48
• 3.1 实验材料38
• 3.1.1 病毒、细胞和实验动物38
• 3.1.2 主要试剂38
• 3.2 实验方法38-41
• 3.2.1 实体瘤注射病毒及活体动物成像38-39
• 3.2.2 细胞预感作病毒后的动物实验39-40
• 3.2.3 制作石蜡切片及 HE 染色40
• 3.2.4 统计和分析40-41
• 3.3 结果41-45
• 3.3.1 实体瘤41-42
• 3.3.2 溶解瘤42-43
• 3.3.3 实体瘤组的 HE 染色43-44
• 3.3.4 溶瘤组的 HE 染色44-45
• 3.4 讨论45-46
• 3.5 结论46-48
• 参考文献48-58
• 致谢58-60
• 附录60-62
• 个人简历62

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王旭;颉玉欣;单保恩;;丹参酮ⅡA对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响[J];癌变.畸变.突变;2008年01期

2 徐瑞华;滕开原;;晚期胃癌化疗进展[J];癌症;2009年10期

3 赵刚;张洪义;;细胞骨架协同基质金属蛋白酶促进肿瘤侵袭的研究进展[J];癌症进展;2012年02期

4 蔡玉晖,谷钰之,张嘉庆,卢平,周庆环;人体胃癌细胞系BGC-823的建立[J];北京医科大学学报;1986年02期

5 陈娜娜;向冬喜;郑丛龙;;腺病毒及其研究进展[J];大连医科大学学报;2010年05期

6 王德成,高洪;细胞凋亡信号转导途径及调控的研究进展[J];动物医学进展;2003年06期

7 孙洪正;徐自忠;周晓黎;董俊;花群义;高洪;范晴;江海天;;水疱性口炎研究进展[J];动物医学进展;2007年10期

8 邹海涛;兰邹然;姜平;;新城疫病毒结构蛋白功能及检测技术研究进展[J];动物医学进展;2012年04期

9 龙华麟;胃癌的治疗现状[J];广西医学;1998年06期

10 杨阔;张小琴;宋永;秦天莺;;分子成像技术及应用[J];河南教育学院学报(自然科学版);2010年04期

本文编号：1057860