EZH2通过调控miR-125b促进乳腺癌细胞增殖和迁移的初步探究

发布时间：2017-10-20 03:28

  本文关键词：EZH2通过调控miR-125b促进乳腺癌细胞增殖和迁移的初步探究

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【摘要】：背景:乳腺癌是女性最常见的一种恶性肿瘤,严重影响着女性群体的身体健康。EZH2(Enhancer of zeste homolog 2)是果蝇zeste基因增强子的人类同源物,PRC2(polycomb repressor complex 2,多梳阻遏蛋白2复合体)复合物具有内在的组蛋白甲基转移酶的活性,其中EZH2是PRC2的核心组分,近期表观遗传学研究表明EZH2常与乳腺癌的不良进展相关。MiRNAs(MicroRNAs,微小RNA)是一类可以在转录后水平沉默靶标mRNA的非编码RNA。MiRNAs的异常调节在包括乳腺癌的多种疾病发生发展的过程中都十分常见。目的:本研究旨在探讨EZH2和miR-125b与乳腺癌之间的关联,并初步探究EZH2和miR-125b作用关系与对乳腺癌细胞增殖活性与迁移过程作用的影响。方法:1.使用免疫组化法和Western blot法分别验证乳腺癌组织、细胞与癌旁正常组织、细胞的EZH2表达水平差异。然后利用实时PCR检测了若干不同乳腺细胞系中miR-125b的mRNA表达水平趋势。2.通过向不同的乳腺癌细胞系转染可以靶向抑制EZH2的siRNA(siRNA-EZH2)后利用实时PCR检测miR-125b的相对表达量。再向非致瘤性乳腺上皮细胞系转染EZH2质粒使之过表达后利用实时PCR检测miR-125b的相对表达量。3.将siRNA-EZH2、miR-125b抑制剂等分组共转染至MDA-MB-231细胞,使用MTT法检测不同处理组细胞增殖情况变化,采用transwell实验检测细胞转移能力变化。4.将EZH2质粒、miR-125bmimics(增强内源性miR-125b功能的模拟生物体内源miR-125b)等分组共转染至HMEC细胞,使用MTT法检测不同处理组细胞增殖情况变化,transwell试验检测细胞转移能力变化。结果:1.乳腺癌细胞或组织中EZH2的表达水平明显高于非致瘤性乳腺上皮细胞或组织而乳腺癌细胞系中miR-125b水平却明显低于非致瘤性乳腺上皮细胞。2.经测,转染siRNA-EZH2的不同乳腺癌细胞系中miR-125b水平均有不同程度上升;转染EZH2质粒的非致瘤性乳腺上皮细胞系中miR-125b水平则明显下降。3.在MDA-MB-231细胞系中,MTT检测结果显示转染siRNA-EZH2后细胞增殖能力明显下降,相应的,transwell试验亦显示细胞转移能力下降明显;而共转染siRNA-EZH2和miR-125b抑制剂组较仅转染siRNA-EZH2组细胞增殖能力有显著提高,细胞转移能力也提升显著。4.在HMEC细胞系中,MTT检测结果显示转染EZH2质粒较对照组细胞增殖能力明显升高;而共转染EZH2质粒和miR-125bmimics组较仅转染EZH2质粒组相比增殖能力受到明显抑制。结论:研究结果表明,敲低EZH2所导致的细胞增殖活性与迁移能力的下降可能与其使miR-125b的表达增加密切相关;过表达EZH2所导致的细胞增殖活性提升可能与其使miR-125b的表达下调密切相关。EZH2或可通过miR-125b靶向促进乳腺癌细胞增殖和迁移,这将为乳腺癌转移的分子机制提供新的见解,或可为生物靶向治疗的应用提供新的研究方向。
【关键词】：EZH2 miR-125b 乳腺癌 细胞增殖 细胞迁移
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 1. 引言12-16
• 2. 材料和方法16-31
• 3. 结果31-40
• 4. 讨论40-46
• 5. 结论46-47
• 参考文献47-53
• 附录53-54
• 致谢54-55
• 综述55-72
• 参考文献66-72

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本文编号：1065007