MiR-335对MDA-MB-231乳腺癌细胞生物学特性的影响及其与C-met靶向关系的验证

发布时间：2017-10-20 10:06

  本文关键词：MiR-335对MDA-MB-231乳腺癌细胞生物学特性的影响及其与C-met靶向关系的验证

  更多相关文章： miR-335 乳腺癌 增殖 迁移 c-Met

【摘要】：Micro RNAs(mi RNAs)是一组内源性基因表达调控因子,自发现至今,已经成为肿瘤研究领域的新热点。随着生物信息学和分子生物学技术的不断发展,部分mi RNAs的功能也逐渐得到确认。研究发现一部分异常表达的mi RNAs与乳腺癌的远处转移有着密切的关系,其中mi R-335(micro RNA-335)表达缺失,提示预后不良。故本论文主要研究mi R-335对具有高转移性的乳腺癌细胞株MDA-MB-231的生物学特性的影响及其与预测靶基因C-met靶向关系的验证。第一部分Mi R-335对MDA-MB-231乳腺癌细胞生物学特性的影响目的:检测mi R-335在乳腺癌细胞系BT474、T47D、MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-231和正常乳腺上皮细胞MCF-10A中的表达以及在原发性乳腺癌和淋巴结转移性乳腺癌组织中的表达情况,进一步研究mi R-335对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响。方法:采用荧光实时定量PCR检测mi R-335在乳腺癌细胞系BT474、T47D、MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-231和正常乳腺上皮细胞MCF-10A中的表达情况以及在原发性乳腺癌和淋巴结转移性乳腺癌组织中的表达情况。体外培养MDA-MB-231细胞并将其分3组,分别为mi R-335组、阴性对照组和空白对照组。mi R-335组转染mi R-335模拟物(has-mi R-335 mimics),阴性对照组转染阴性对照序列(negative control,NC),空白对照组细胞不行任何转染。通过MTT实验检测过表达mi R-335对细胞增殖能力的影响;流式细胞仪检测过表达mi R-335对细胞凋亡的影响;Transwell实验检测过表达mi R-335对细胞迁移能力的影响。Western blot检测MMP-2和MMP-9的蛋白表达情况。结果:各乳腺癌细胞系中mi R-335表达水平均低于正常乳腺上皮细胞MCF-10A,MDA-MB-231细胞中最低(P0.01)。在随机配对的10例原发性乳腺癌和10例淋巴结转移性乳腺癌标本中,有7例淋巴结转移性乳腺癌中Mi R-335的表达低于对应的原发性乳腺癌(P0.05)。过表达mi R-335对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡无明显影响(P0.05),但能显著抑制细胞的迁移能力(P0.05)。Western blot结果显示:mi R-335组MMP-2和MMP-9的蛋白的表达量均低于阴性对照组和空白对照组。结论:mi R-335在高转移性乳腺癌细胞系和淋巴结转移性乳腺癌组织中明显低表达,过表达mi R-335对MDA-MB-231细胞的增殖、凋亡无明显影响却抑制MDA-MB-231细胞的迁移能力。mi R-335可能通过下调MMP2和MMP9的表达从而抑制MDA-MB-231细胞迁移。第二部分mi R-335与C-met靶向关系的验证目的:通过对Mi R-335与C-met靶向关系的验证进一步研究其在乳腺癌细胞中具体作用机制。方法:Pic Tar(www.pictar.org)、Targetscan数据库(www.target scan.org)预测mi R-335可能靶基因。荧光定量PCR及WB检测mi R-335、c-Met在乳腺癌各细胞系和正常乳腺上皮细胞中的表达。构建靶基因荧光报告载体,BT20、MDA-MB-231细胞共转染野生型c-Met 3’UTR荧光素酶报告载体、突变型c-Met 3’UTR荧光素酶报告载体和mi R-335 mimics、mimics control,转染后分别分为c-Met 3’UTR-wt组和c-Met 3’UTR-mut组并经荧光素酶报告基因检测测定活性,BT20、MDA-MB-231细胞分别转染mi R-335 mimics、mimics control和m i R-335 ASO、ASO control后通过Western blot蛋白水平检测评估cMet表达情况。结果:Targetscan数据库预测显示C-Met的3’UTR区存在mi R-335的可能结合位点。荧光定量PCR及WB结果显示:各乳腺癌细胞系中,c-Met在BT-20、MDA-MB-231细胞中的蛋白表达水平明显升高,而在正常乳腺上皮细胞MCF-10A和其他乳腺癌细胞系中蛋白表达水平相对较低。相反,mi R-335在BT-20、MDA-MB-231细胞中的RNA表达水平降低,在正常乳腺上皮细胞MCF-10A和其他乳腺癌细胞系中RNA表达水平升高。荧光素酶报告基因检测结果显示:BT-20、MDA-MB-231细胞中,c-Met 3’UTR-wt组中转染mi R-335 mimics的细胞较转染mimics control的细胞相对荧光强度明显降低,c-Met 3’UTR-mut组中转染mi R-335 mimics的细胞与转染mimics control的细胞相对荧光强度无明显变化。Western blot结果显示mi R-335 mimics组较mimics control组蛋白表达水平降低,mi R-335 ASO组较ASO control组蛋白表达水平升高。结论:乳腺癌各细胞系中mi R-335 m RNA水平表达和c-Met蛋白水平表达呈负相关,mi R-335能够与c-Met m RNA 3’UTR区特异性结合并抑制其表达,mi R-335在翻译后修饰水平调控c-Met的表达。综上所述,本实验通过生物信息学及细胞生物学技术验证了mi R-335与c-Met的靶向关系。
【关键词】：miR-335 乳腺癌 增殖 迁移 c-Met
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-17
• 第一部分：Mi R-335 对MDA-MB-231 乳腺癌细胞生物学特性的影响17-34
• 1 材料与方法17-26
• 2 结果26-32
• 3 讨论32-34
• 第二部分：mi R-335 与C-met靶向关系的验证34-49
• 1 材料与方法34-43
• 2 结果43-47
• 3 讨论47-49
• 全文总结49-50
• 参考文献50-53
• 文献综述53-62
• 参考文献59-62
• 致谢62-63
• 攻读硕士学位期间发表的论文63

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 黄啸原;用“印度阅兵”形容乳腺癌合适吗?[J];诊断病理学杂志;2001年02期

2 张嘉庆,王殊,乔新民;乳腺癌的现状和远景[J];中华外科杂志;2002年03期

3 张维彬,汪波,石灵春;中医药在现代乳腺癌治疗中的运用[J];中国中西医结合急救杂志;2002年01期

4 薛志勇;食物与乳腺癌[J];山东食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建军,郑国华;乳腺癌相关标志物的研究进展[J];山东医药;2002年33期

6 陆尚闻;;男人也患乳腺癌[J];环境;2003年12期

7 ;新技术清晰拍摄早期乳腺癌细胞[J];上海生物医学工程;2005年04期

8 田富国;郭向阳;张华一;;乳腺癌诊治研究新进展[J];肿瘤研究与临床;2005年S1期

9 马涛,谷俊朝;血管内皮生长因子与乳腺癌的临床研究进展[J];国外医学(外科学分册);2005年01期

10 郭庆良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相关性研究进展[J];国外医学.外科学分册;2005年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 于永利;;抗乳腺癌免疫治疗融合蛋白[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

2 郭红飞;;中医治疗乳腺癌的策略[A];江西省中医、中西医结合肿瘤学术交流会论文集[C];2012年

3 庞朋沙;伍会健;;乳腺癌治疗靶标的研究进展[A];北方遗传资源的保护与利用研讨会论文汇编[C];2010年

4 陆劲松;邵志敏;吴炅;韩企夏;沈镇宙;;新型维甲酸抑制乳腺癌细胞的生长及诱导凋亡的机制研究[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

5 刘爱国;胡冰;;乳腺癌临床治疗进展[A];安徽省抗癌协会第四次代表大会暨乳腺癌、肺癌专业委员会成立会议、安徽省肿瘤防治进展学术研讨会论文汇编[C];2001年

6 张嘉庆;王殊;乔新民;;乳腺癌的现状和远景[A];第一届全国中西医结合乳腺疾病学术会议论文汇编[C];2002年

7 刘清俊;;乳腺癌综合治疗的新进展[A];山西省抗癌协会第六届肿瘤学术交流会论文汇编[C];2003年

8 邵志敏;;21世纪乳腺癌治疗的展望[A];第三届中国肿瘤学术大会教育论文集[C];2004年

9 陈松旺;张明;;乳腺癌治疗的回顾与展望[A];西部地区肿瘤学学术会议论文汇编[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凯阳;王兆钺;阮长耿;;组织因子途径抑制物-2在乳腺癌细胞中的表达研究[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 ;血检有望揭示乳腺癌治疗效果[N];医药经济报;2004年

2 记者 郑晓春;乳腺癌细胞扩散基因被找到[N];科技日报;2007年

3 中国军事医学科学院肿瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新疗法[N];中国妇女报;2002年

4 王艳红;抑制ＤＮＡ修补可消灭乳腺癌细胞[N];医药经济报;2005年

5 詹建;乳腺癌饮食 两个时期不一样[N];中国中医药报;2006年

6 辛君;乳腺癌扩散基因“浮出水面”[N];大众卫生报;2009年

7 记者 毛黎;美发现有效抑制乳腺癌细胞生长的分子[N];科技日报;2010年

8 记者 吴春燕　通讯员 王丽霞;乳腺癌治疗将有新途径[N];光明日报;2011年

9 王乐　沈基飞;我科学家发现导致乳腺癌耐药的新标志物[N];科技日报;2011年

10 刘霞;一种天然分子能阻止乳腺癌恶化[N];科技日报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 柴红燕;疾病状态下CYP4Z1和4A的生物学行为及其药物干预研究[D];武汉大学;2012年

2 李凯;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白调控乳腺细胞的分化并影响乳腺癌的预后[D];复旦大学;2014年

3 江一舟;乳腺癌新辅助化疗前后基因变异检测及其功能论证[D];复旦大学;2014年

4 马邵;酪氨酸去磷酸化增强表皮生长因子受体在乳腺癌治疗中靶向性的研究[D];山东大学;2015年

5 姚若斯;精氨酸甲基转移酶PRMT7诱导乳腺癌细胞发生表皮—间质转换及转移的作用机制研究[D];东北师范大学;2015年

6 侯培锋;α-酮戊二酸二甲酯(DM-2KG)上调缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)诱发高致瘤性干细胞样乳腺癌细胞机制研究[D];福建医科大学;2014年

7 李丽丽;分泌蛋白SHON调控乳腺癌细胞EMT的分子机制研究[D];东北师范大学;2015年

8 陈丽艳;PI3K抑制剂联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂对乳腺癌协同杀伤作用的分子机制研究[D];延边大学;2015年

9 朴俊杰;乳腺癌差异基因筛选及PAIP1对其生物学行为的影响[D];延边大学;2015年

10 汪[?如;染色体6q25.1区域基因多态性与乳腺癌遗传易感性的关联研究[D];南方医科大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 杜文英;乳腺癌分子亚型的临床与病理特点[D];郑州大学;2011年

2 单系金;Mfn2磷酸化修饰对其调控乳腺癌细胞增殖功能的重要性的研究[D];河北联合大学;2014年

3 徐晶;缺氧对乳腺癌细胞miR-210表达及侵袭能力的影响[D];河北联合大学;2014年

4 李丽;Mfn2对乳腺癌细胞MCF-7侵袭迁移能力的影响及机制探究[D];河北联合大学;2014年

5 杨洋;醌氧化还原酶及其抑制剂在乳腺癌增殖与迁移中的作用研究[D];延边大学;2015年

6 张秀娟;免疫组化与荧光原位杂交检测乳腺癌Her-2表达的对比研究及17号染色多体对检测结果的影响[D];泰山医学院;2014年

7 韩晶;纳米脂质体多西他赛抑制乳腺癌细胞增殖降低骨髓毒性的机制[D];安徽大学;2015年

8 钟显峰;乳腺癌的分子亚型与淋巴结转移的关系研究[D];泰山医学院;2014年

9 张硕稳;MTDH、IκB、NF-κB P65在乳腺癌组织中的表达及意义[D];河北医科大学;2015年

10 谢少利;RNAi阻低UBE3A后对乳腺癌细胞MDA-MB-231生物学行为的影响及其机制研究[D];川北医学院;2015年

，

本文编号：1066679