葡萄糖调节蛋白78对肝癌细胞增殖、自噬及体外血管生成的影响

发布时间：2017-10-21 15:00

  本文关键词：葡萄糖调节蛋白78对肝癌细胞增殖、自噬及体外血管生成的影响

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【摘要】：目的:本研究旨在探讨GRP78si RNA干扰GRP78表达对体外培养的肝癌细胞株增殖、自噬和体外血管生成的影响及其作用机制,为探索有效抗肿瘤和抗肿瘤血管生成药物提供新靶点与新思路。方法:1.GRP78最佳si RNA筛选:设计合成si RNA转染体外培养肝癌细胞株MHCC97H,通过Western blot分析筛选出最佳干扰片段;2.实验分三组,即空白对照组(control group),阴性对照组(si Control group)和实验组(si GRP78 group);3.MTT法检测下调GRP78表达后肝癌细胞增殖活力变化;4.流式细胞仪检测下调GRP78表达后对肝癌细胞株huh7和SMMC7721细胞周期分布的影响;5.Western blot分析下调肝癌细胞GRP78表达后各组LC3-Ⅱ、CCND1、AKT、p-AKT蛋白表达变化;6.收集转染肝癌细胞培养基上清行体外血管生成实验:HUEVC平板克隆形成和划痕迁移检测GRP78对肿瘤微环境中血管生成的影响。结果:1.GRP78si RNA特异性下调肝癌细胞GRP78表达;2.下调GRP78表达可抑制肝癌细胞增殖;3.下调GRP78表达可诱导肝癌细胞阻滞在G0/G1期;4.下调GRP78表达可显著降低肝癌细胞周期蛋白CCND1的表达;5.下调GRP78表达可显著降低肝癌细胞自噬标志蛋白LC3-Ⅱ的表达;6.下调GRP78表达可显著降低肝癌细胞AKT磷酸化水平;7.下调GRP78表达可显著抑制体外血管生成:HUEVC平板克隆形成和划痕迁移。结论:1.GRP78si RNA转染肝癌细胞能够特异性下调GRP78表达,并抑制细胞增殖,诱导huh7和SMMC7721细胞周期阻滞;2.下调huh7和SMMC7721细胞GRP78后可能通过影响PI3K/AKT信号通路和Cyclin D1表达,而诱导huh7和SMMC7721细胞周期阻滞;3.下调huh7细胞GRP78后,可显著抑制细胞自噬和体外血管生成。
【关键词】：肝癌 GRP78 细胞增殖 自噬 肿瘤血管生成
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 第1章 引言9-11
• 第2章 材料与方法11-26
• 2.1 材料11-13
• 2.1.1 细胞株11
• 2.1.2 主要实验仪器11-12
• 2.1.3 主要试剂和耗材12-13
• 2.2 方法13-26
• 2.2.0 试剂配制13-14
• 2.2.1 细胞培养14-17
• 2.2.3 RNA干扰片段的合成17
• 2.2.4 细胞转染17-18
• 2.2.5 最佳siGRP78 片段筛选18-19
• 2.2.6 MTT法检测GRP78 对huh7、SMCC7721 肝癌细胞生长的影响19-20
• 2.2.7 流式细胞技术检测GRP78 对肝癌细胞株huh7、SMMC7721 细胞周期分布的影响20
• 2.2.8 Western blot检测GRP78 对肝癌细胞蛋白表达的影响20-24
• 2.2.9 平板克隆、划痕实验检测GRP78 对体外血管生成的影响24-25
• 2.2.10 统计学方法25-26
• 第3章 结果26-32
• 3.1 GRP78siRNA转染MHCC97H细胞对GRP78 蛋白表达的影响26
• 3.2 下调GRP78 表达抑制肝癌细胞株MHCC97H增殖26-27
• 3.3 下调GRP78 表达诱导肝癌细胞株huh7 和SMMC7721 阻滞在G0/G1 期27-29
• 3.4 下调GRP78 表达降低肝癌细胞株huh7 和SMMC7721 细胞周期蛋白CCND1表达29
• 3.5 下调GRP78 表达对肝癌细胞株huh7 自噬的影响29-30
• 3.6 下调GRP78 表达抑制肝癌细胞株huh7 激活PI3K/AKT通路30
• 3.7 下调GRP78 表达抑制体外血管生成30-32
• 3.7.1 GRP78 对HUVEC平板克隆形成的影响30
• 3.7.2 GRP78 对HUVEC迁移能力的影响30-32
• 第4章 讨论32-38
• 4.1 GRP78 的结构和功能32-33
• 4.2 GRP78 对肝癌细胞细胞周期分布的影响33-34
• 4.3 GRP78 对肝癌细胞PI3K/AKT信号通路的影响34-35
• 4.4 GRP78 对肝癌细胞自噬的影响35-36
• 4.5 GRP78 对肿瘤微环境中血管生成的影响36-38
• 第5章 结论38-39
• 致谢39-40
• 参考文献40-44
• 攻读学位期间的研究成果44-45
• 综述45-52
• 参考文献50-52

【参考文献】

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本文编号：1073973