新型AMPK激活剂Hh-009诱导的抗胶质瘤作用及其机制研究

发布时间：2017-10-22 07:12

  本文关键词：新型AMPK激活剂Hh-009诱导的抗胶质瘤作用及其机制研究

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【摘要】：研究目的:神经胶质瘤(简称胶质瘤)是一种常见的原发性颅内恶性肿瘤,其特点是发病率和死亡率高。目前胶质瘤的常规治疗方法效果较差,患者的五年生存率低。现有的胶质瘤化疗药物(替莫唑胺等)由于毒性较大,且容易产生化疗抗性。因此,开发一种更加有效的胶质瘤化疗药物迫在眉睫。本项目旨在观察我们开发的新型磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)激活剂Hh-009体内、外抗胶质瘤细胞的作用,解析作用的分子机制。研究方法:a)利用MTT分析检测Hh-009对胶质瘤细胞增殖和存活的影响,集落形成实验检测Hh-009对胶质瘤细胞增殖的作用。b)Trypan Blue染色分析检测细胞死亡,Annexin V/PI双染法对细胞进行染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡。用碘化丙啶对细胞染色,流式细胞仪检测细胞周期。c)Western blotting检测AMPK、AKT-m TOR、EGFR/PDGFR等信号通路活化水平的改变,同时检测肿瘤细胞自噬相关蛋白。通过荧光显微镜检测LC3B-GFP表达。d)构建裸鼠U87细胞移植瘤模型,腹腔注射给予不同浓度的Hh-009,电子天平称量小鼠体重、用游标卡尺测量肿瘤大小。分离肿瘤组织及肿瘤周围正常组织,通过免疫组化检测PDGFR表达水平。研究结果:a)细胞活性实验结果表明Hh-009浓度依赖性地抑制胶质瘤细胞存活;集落形成实验证明Hh-009浓度依赖性地抑制胶质瘤细胞增殖。b)实验结果证明Hh-009诱导胶质瘤细胞死亡、细胞凋亡。此外,还能将周期阻滞在有丝分裂S期。c)Western blotting结果揭示Hh-009介导胶质瘤细胞AMPK活化、诱导细胞发生自噬,阻断胶质瘤细胞AKT-m TOR信号通路,导致胶质瘤细胞PDGFR、EGFR等生长因子受体表达下调。d)裸鼠移植瘤实验证明Hh-009显著抑制在体胶质瘤生长,且随着Hh-009的使用浓度增加,肿瘤抑制率升高。结论:Hh-009是一个新型的AMPK激活剂,激活AMPK的同时,阻断AKT-m TOR信号通路、下调生长因子受体PDGFR、EGFR表达。我们体内、外实验证明Hh-009对神经胶质瘤有明显的抑制作用。
【关键词】：神经胶质瘤 Hh-009 磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK) 新型AMPK激活剂
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.4
【目录】：

• 中文提要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-14
• 材料与方法14-25
• 材料14-17
• 细胞系14
• 主要实验药物14
• 主要试剂14-15
• 主要仪器15-16
• 主要抗体16-17
• 实验动物17
• 方法17-25
• 1. 主要试剂配方17-19
• 2．主要实验方法19-25
• 结果25-41
• 1 Hh-009浓度依赖性地抑制胶质瘤细胞存活，，增殖25-27
• 1.1 Hh-009浓度依赖性地抑U87、U251细胞存活25-26
• 1.2 Hh-009对小鼠星形胶质细胞存活没有显著影响26
• 1.3 Hh-009对胶质瘤细胞增殖的抑制作用26-27
• 2. Hh-009诱导胶质瘤细胞死亡27-30
• 2.1 Hh-009诱导胶质瘤细胞死亡27-28
• 2.2 Hh-009诱导胶质瘤细胞发生凋亡28-29
• 2.3 Hh-009诱导胶质瘤细胞发生细胞有丝分裂周期阻滞29-30
• 3. Hh-009抑制胶质瘤的机制研究30-37
• 3.1 Hh-009诱导胶质瘤细胞AMPK激活31-32
• 3.2 Hh-009诱导胶质瘤细胞发生自噬32-34
• 3.3 Hh-009诱导胶质瘤细胞AKT-mTOR信号通路阻断34-35
• 3.4 Hh-009诱导胶质瘤细胞PDGFR/EGFR等生长因子受体表达下调35-37
• 4. 裸鼠移植瘤模型研究Hh-009抗胶质瘤作用37-41
• 4.1 Hh-009裸鼠实验抗胶质瘤研究37-41
• 结论41-42
• 讨论42-45
• 参考文献45-53
• 恶性神经胶质瘤治疗的分子机制53-67
• 参考文献60-67
• 中英文缩写词表67-68
• 致谢68-70

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本文编号：1077284