粪便脱落细胞学和外周血标志物筛查结直肠癌的研究

发布时间：2017-10-23 14:12

  本文关键词：粪便脱落细胞学和外周血标志物筛查结直肠癌的研究

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【摘要】：研究背景结直肠癌(俗称大肠癌)是全球范围内常见的恶性肿瘤之一,其发病率及病死率均居于恶性肿瘤的第3位。近年以来,我国大肠癌的发病率正在逐渐增多,由上世纪70年代初的12/10万增长到目前的56/10万,已成为威胁公众健康和生命安全的重大疾病。研究表明,有效的早期筛查和干预治疗可明显的大幅度地降低大肠癌的发病率与死亡率。目前最广泛使用的大肠癌筛查方法是粪便隐血试验(FOBT)检测、电子结肠镜检查和活体组织取检及病理等等。粪便隐血试验比较常用,但是它的敏感性和特异性都比较低,而且假阴性率及假阳性率均较高。结肠镜检查和活体组织取检及病理作为目前临床筛查和临床诊断的一种金标准,但结肠镜检查毕竟是一项有创操作而且其检查费用也较高,不能推广为为一线筛查方法。粪便检测简便、特异性较高、无创、患者依从性好且肠道无需做特殊的检测前准备,可以作为大肠癌早期筛查和早期诊断的一种重要手段。然而,粪便中除含有脱落细胞外还混有大量的杂质如细菌、食物残渣、胆汁及肠黏液等,从而导致脱落细胞提取的纯度不高。目前常用的细胞提取方法包括细胞离心淘洗法、细胞密度梯度离心法以及细胞免疫磁珠法,但上述的三种提取方法因细胞涂片背景不清、费时、费力、费用高、操作繁琐等缺点大大限制了其在临床筛查中的应用。因此,本研究的第一部分我们采用纳米Fe_3O_4叶酸磁珠替代免疫磁珠来采集脱落细胞,并进一步探讨该方法在临床大肠癌诊断应用的可行性及其临床筛查效率。另外,最近研究发现SEPT9基因的过甲基化可以做为早期检测大肠癌的分子标志物,但是前期研究使用的都是最早期的SEPT9检测方法,而且实验对象人群均为西方国家人群。通过改进工艺和实验流程,新一代的SEPT9基因甲基化检测方法提高了对微量游离DNA的分析水平,理论上可提高检测结直肠癌的性能,但是目前相关研究还很少。因此,在本研究的第二部分,我们评估了外周血标志物新一代SEPT9基因甲基化检测方法在中国人群结直肠癌早期诊断中的作用,并与免疫法粪隐血试验(FIT)进行了比较。研究目的第一部分旨在探讨纳米Fe_3O_4叶酸磁珠富集大肠癌患者粪便脱落细胞的可行性及其临床筛选效率。第二部分旨在探讨外周血标志物新一代SEPT9基因甲基化检测方法在中国人群结直肠癌早期诊断中的作用,并与FIT进行了比较。研究方法探讨纳米Fe_3O_4叶酸磁珠富集法提取粪便脱落细胞的可行性及其临床意义。第一,采用大肠癌患者粪便脱落细胞富集筛检试验对纳米Fe_3O_4叶磁珠富集法提取粪便脱落细胞的可行性进行评估。第二,采用体外培养大肠癌HCT116细胞富集筛检试验对纳米Fe_3O_4叶酸磁珠富集法提取粪便脱落细胞的可行性进行评估。探讨外周血标志物SEPT9检测结直肠癌的敏感性和特异性。第一,采用电子结肠镜检查和活体组织取检及病理诊断为金标准的回顾性病例一对照研究。研究对象为经电子结肠镜检查和病理诊断确诊的大肠癌患者与健康正常人。第二,采用配对研究的方法直接比较SEPT9和FIT的检测性能。研究结果探讨纳米Fe_3O_4叶酸磁珠富集法提取粪便脱落细胞的可行性及其临床意义1.体外培养大肠癌细胞检测磁珠包被系统的富集效率1.1周围包被高糖化合物的纳米Fe_3O_4叶酸磁珠悬液放置时间较长不会出现磁珠与液体分层,悬液稳定性好,磁珠不会沉淀于试管底部,能较清楚的观察细胞内部结构,不影响观察细胞特性。1.2体外大肠癌脱落细胞培养的最佳反应条件体外大肠癌脱落细胞培养的最佳反应条件为40ul周围包被高糖化合物的纳米叶酸磁珠加入100ul大肠癌细胞HCT116悬液(10× 105/ml),在37℃水浴中孵育60min,将装有孵育后纳米叶酸磁珠-细胞混悬液的离心管与磁铁进行15min的贴壁反应。2.纳米Fe_3O_4叶酸磁珠富集大肠癌患者粪便脱落细胞的验证实验2.1粪便脱落细胞学检出大肠癌的敏感性情况脱落细胞检查大肠癌的敏感性高达66%(33/50);异型细胞的阳性检出率与大肠癌的分布部位有显著相关性(P0.05)。2.2粪便脱落细胞学与粪便隐血试验对大肠癌检出的特异性情况粪便脱落细胞检查大肠癌的特异性高达100%;粪便脱落细胞检测大肠癌的特异性明显高于粪便潜血试验(P0.05)。2.3大肠癌患者清肠便与自然便的脱落细胞学检查结果情况自然便与清肠便联合脱落细胞学检测的敏感性远高于单次清肠便或自然便脱落细胞学检测的敏感性,联合检测的敏感性可高达92%(46/50)。2.4细胞涂片观察纳米Fe_3O_4叶酸磁珠法与三层筛网一体法收集脱落细胞情况从细胞涂片的效果观察发现三层筛网一体法收集的脱落细胞分布不均,常呈片块状,背景有大量粪便残渣,严重影响观察细胞形态,而纳米叶酸磁珠法富集的脱落细胞分散均匀,涂片背景仅有极少量粪便残渣,相对比较干净不影响观察细胞形态探讨外周血标志物SEPT9检测结直肠癌的敏感性和特异性1.经结肠镜检查和病理诊断确诊的大肠癌患者与健康正常人回顾性病例—对照研究结果1.1 在肿瘤性病变中,可见随着病变的进展,即从非进展期腺瘤、进展期腺瘤但无高级别瘤变,到高级别瘤变,最后到结直肠癌,SEPT9的阳性率逐渐升高。1.2 SEPT9对结直肠癌的敏感性为74.8%(95%CI:67.0%-81.6%),特异性为87.4%;SEPT9的阳性率随结直肠癌分期的进展而升高1.3 SEPT9的阳性率在不同的年龄、性别、肿瘤部位亚组间均没有显著差异2.配对研究比较了SEPT9和FIT的检测性能2.1 SEPT9较FIT检查对结直肠癌具有更好的检出性能。2.2 SEPT9和FIT联合检测结直肠癌可以显著的提高检出率研究结论1.纳米叶酸磁珠法可显著提高粪便脱落细胞的检出敏感性,为大肠癌的早发现、早诊断提供可靠有效方法,而且纳米叶酸磁珠检测法不仅可增加异性细胞检出效率,而且可保持被分离靶细胞的形态和功能的完整,细胞图片显示脱落细胞分散均匀,背景清楚,不影响观察细胞形态。2.SEPT9具有良好的大肠癌检出性能,可以用于大肠癌筛查。新一代SEPT9检查方法比我们所使用的FIT在大肠癌的检出上具有更好的性能,也优于文献报道的第一代SEPT9检测性能。联合使用SEPT9和FIT检测大肠癌可能会提高检出率和筛查效果
【关键词】：大肠癌 纳米Fe_3O_4叶酸磁珠 免疫法粪隐血试验 SEPT9基因
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.34
【目录】：

• 缩略语表4-6
• 英文摘要6-11
• 中文摘要11-14
• 第一章 前言14-15
• 第二章 纳米FE_3O_4叶酸磁珠富集法提取粪便脱落细胞的临床价值及意义15-31
• 2.1 材料和方法15-20
• 2.2 结果20-28
• 2.3 讨论28-30
• 2.4 结论30-31
• 第三章 外周血游离SEPT9基因甲基化检测结直肠癌的研究31-42
• 3.1 材料与方法32-34
• 3.2 结果34-38
• 3.3 讨论38-41
• 3.4 结论41-42
• 全文总结42-49
• 参考文献43-49
• 文献综述一 粪便脱落细胞及其标记物筛查大肠癌的研究进展49-65
• 参考文献60-65
• 文献综述二 大肠癌的筛检与监测65-75
• 参考文献70-75
• 在读硕士期间论文发表情况75-76
• 致谢76

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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本文编号：1083786