人类胰腺癌细胞中ROS和caspase在TRAIL诱导下的凋亡和凋亡性坏死中功能的研究
本文关键词:人类胰腺癌细胞中ROS和caspase在TRAIL诱导下的凋亡和凋亡性坏死中功能的研究
更多相关文章: TRAIL ROS 凋亡 坏死 胰腺癌 凋亡性坏死
【摘要】:目的:通过检测在凋亡和凋亡性坏死发生时信号通路中的活性氧簇、caspase家族分子的表达与变化,分析它们在凋亡和坏死性凋亡中的功能及联系,为后续研究凋亡和凋亡性坏死发生过程中的功能及在胰腺癌中的作用机制提供实验支持和研究思路,为胰腺癌临床治疗提供治疗策略。方法:1.通过对TRAIL处理下的WST-8细胞活力检测,筛选出对TRAIL敏感的细胞系。通过检测细胞表面的TRAIL受体,证明TRAIL可以作用于TRAIL敏感性的胰腺癌细胞。最终通过流式细胞术检测TRAIL诱导下,在TRAIL敏感性胰腺癌细胞中,ROS的产生。2.通过ROS抑制剂NAC和Tempol来抑制胰腺癌细胞中ROS的水平,用流式细胞术检测这种情况下TRAIL敏感性胰腺癌细胞的情况。3.在检测ROS抑制时,TRAIL处理过的胰腺癌细胞的凋亡情况时,出现了凋亡性坏死特征的细胞群。因此,通过凋亡性坏死特异性抑制剂Nec-1,用流式细胞术来验证这群细胞是否可能为凋亡性坏死细胞群。4.我们首先检测了两株胰腺癌细胞中凋亡坏死进程中的关键性分子RIP3的表达。为了进一步验证我们对于出现的Annexin V-/PI+细胞群就是凋亡性坏死细胞群的想法,我们设计了利用si RNA沉默RIP3的实验。并通过细胞活力实验、流失细胞术的检测,对比RIP3沉默前后胰腺癌细胞系的变化。5.通过免疫印迹检测TRAIL处理后,两株胰腺癌细胞中caspase表达的变化。接着,我们用caspase抑制剂后,使用流式细胞术检测细胞凋亡及坏死性凋亡的情况。6.为了研究caspase-2,-9和ROS的关系。我们首先抑制了caspase-9,通过免疫印迹观察caspase-2的变化;接着caspase-2被抑制,通过免疫印迹观察caspase-2的变化。通过流式细胞术,我们还检测了caspase-2,caspase-9抑制剂存在时,TRAIL处理后的细胞中ROS水平的变化。结果:1.TRAIL敏感性胰腺癌细胞中会产生ROS。2.在Mia Pa Ca-2中抑制ROS会减少TRAIL诱导下的凋亡的产生。3.ROS抑制下在TRAIL诱导的胰腺癌细胞中凋亡性坏死的产生。4.ROS抑制下在TRAIL处理Bx PC-3细胞,出现依赖RIP3的凋亡性坏死。5.Caspase-2,-9参与到了在TRAIL诱导下的凋亡和坏死性凋亡。6.Caspase-2/9和ROS在TRAIL处理后的癌细胞中没有交叉结论:ROS、caspase-2,-9参与了凋亡与坏死性凋亡。Mia Pa Ca-2作为ROS高表达细胞系,ROS的水平的高低与凋亡的程度成正比。ROS抑制时,两株细胞都会出现凋亡性坏死的现象,其中Bx PC-3为RIP3依赖性凋亡性坏死。在凋亡和坏死性凋亡的过程中,caspase-2是caspase-9的上游信号分子,ROS与caspase-2,-9没有交叉。.
【关键词】:TRAIL ROS 凋亡 坏死 胰腺癌 凋亡性坏死
【学位授予单位】:宁夏医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R735.9
【目录】:
- 摘要4-6
- Abstract6-8
- 中英文缩略词8-10
- 前言10-13
- 实验材料及方法13-35
- 1 实验材料13-16
- 2 方法16-35
- 结果35-51
- 讨论51-55
- 结论55-56
- 参考文献56-61
- 综述61-72
- 参考文献68-72
- 致谢72-73
- 读学位期间发表的学术论文73-74
- 个人简历74
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,本文编号:1095881
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