自噬调控对JAK2 V617F阳性HEL细胞及真性红细胞增多症患者造血细胞增殖的影响
本文关键词：自噬调控对JAK2 V617F阳性HEL细胞及真性红细胞增多症患者造血细胞增殖的影响
更多相关文章： 自噬 真性红细胞增多症 JAK2 V617F突变 细胞增殖
【摘要】：目的:通过检测JAK2 V617F阳性HEL细胞及真性红细胞增多症(PV)患者造血细胞自噬水平,探索自噬调控对HEL细胞及PV患者造血细胞增殖的影响。方法:1.检测JAK2 V617F阳性HEL细胞自噬活性:应用流式细胞术及吖啶橙(AO)染色法检测HEL细胞内LC3-蛋白的表达,以JAK2 V617F阴性K562细胞为对照;2.诱导或抑制JAK2 V617F阳性HEL细胞自噬后检测细胞内LC3-Π蛋白的表达:自噬诱导剂雷帕霉素(终浓度为10μmol/L)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(终浓度10mmol/L)分别作用于HEL细胞48h后,流式细胞术和吖啶橙(AO)染色法检测HEL细胞内LC3-Π蛋白的表达。3.诱导或抑制JAK2 V617F阳性HEL细胞自噬活性后Cell Titer-Glo○R发光法检测细胞增殖活力:自噬诱导剂雷帕霉素(终浓度为10μmol/L)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(终浓度10mmol/L)分别作用于HEL细胞0h、12h、24h、48h后,Cell Titer-Glo○R发光法检测细胞增殖活力。4.检测JAK2 V617F阳性PV患者外周血细胞自噬活性:采集12例临床上确诊的JAK2 V617F阳性PV患者外周血,以15例健康体检者外周血为对照,流式细胞术和Western blot法检测JAK2 V617F阳性PV患者外周血细胞内LC3-Ⅱ蛋白的表达。5.诱导或抑制自噬后检测JAK2 V617F阳性PV患者骨髓细胞内LC3-Ⅱ蛋白的表达:自噬诱导剂雷帕霉素(终浓度为10μmol/L)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(终浓度10mmol/L)分别作用于JAK2 V617F阳性PV患者骨髓细胞48h后,流式细胞术和Western blot法检测细胞内LC3-Ⅱ蛋白的表达。6.诱导或抑制JAK2 V617F阳性PV患者骨髓细胞自噬活性后Cell Titer-Glo○R发光法检测细胞增殖活力:自噬诱导剂雷帕霉素(终浓度为10μmol/L)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(终浓度10mmol/L)分别作用于JAK2 V617F阳性PV患者骨髓细胞0h、12h、24h、48h后,Cell Titer-Glo○R发光法检测细胞增殖活力。结果:1.LC3-Ⅱ蛋白在HEL细胞内的表达水平流式细胞术检测HEL细胞内LC3-Ⅱ蛋白的平均荧光强度值明显高于JAK2 V617F阴性K562细胞,分别为(159388.67±29001.10)、(96046.67±24134.08)(P㩳0.05);AO染色荧光显微镜观察HEL细胞内自噬体形成明显高于K562细胞。2.自噬活性改变后JAK2 V617F阳性HEL细胞内LC3-Ⅱ蛋白表达流式细胞术检测结果显示对照组、雷帕霉素处理组、3-甲基腺嘌呤处理组三组细胞内LC3-II蛋白的平均荧光强度值分别为(95533.33±4273.56)、(268333.30±33560.89)、(20000.00±7285.60)(P㩳0.05)。3.自噬活性改变对JAK2 V617F阳性HEL细胞增殖活力的影响HEL细胞常规培养,于12h、24h、48h各时间点检测细胞活力,细胞呈增殖状态;自噬诱导剂雷帕霉素作用于HEL细胞12h、24h、48h后,各时间点检测细胞增殖活力较对照组对应各时间点明显增强(P㩳0.05);而自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤作用于HEL细胞,于12h、24h、48h各时间点观察细胞增殖活力较对照组对应各时间点明显降低(P㩳0.05),48h时雷帕霉素处理组(101413.00±3 720.54)、3-MA处理组(5732.00±165.64)细胞增殖活力与对照组(29435.33±971.84)比较差异有统计学意义(P㩳0.05)。4.JAK2 V617F阳性PV患者外周血细胞内LC3-Ⅱ蛋白的表达流式细胞术检测12例PV患者外周血中髓系细胞内LC3-Ⅱ蛋白平均荧光强度值明显高于15例健康体检者外周血髓系细胞,分别为(92841.67±4249.59)、(86633.33±2503.90)(P㩳0.05);Western blot检测3例PV患者外周血细胞内LC3-II蛋白表达高于健康体检者。5.诱导或抑制自噬对JAK2 V617F阳性PV患者骨髓细胞内LC3-Ⅱ蛋白表达的影响流式细胞术检测结果显示,对照组、雷帕霉素处理组、3-甲基腺嘌呤处理组三组髓系细胞内LC3-Ⅱ蛋白平均荧光强度值分别为(75433.33±10920.78)、(98000.00±2475.88)、(48733.33±6978.78),三组差异均有统计学意义(P㩳0.05);Western blot检测结果显示,3-MA处理组骨髓细胞内LC3-Ⅱ蛋白表达较对照组明显降低;雷帕霉素处理组骨髓细胞内LC3-Ⅱ蛋白表达较对照组升高。6.自噬活性改变对JAK2 V617F阳性PV患者骨髓细胞增殖活力的影响PV患者骨髓细胞常规培养,随培养时间延长呈增殖趋势,应用雷帕霉素和3-MA分别诱导和抑制自噬,于0h、12h、24h、48h各时间点观察细胞增殖活力,结果显示,雷帕霉素和3-MA对PV患者骨髓细胞分别有促进和抑制细胞增殖的作用,与对照组对应各时间点比较,差异均有统计学意义(P㩳0.05),48h时对照组、雷帕霉素处理组、3-MA处理组细胞增殖活力分别为(16200.33±680.00)、(18743.67±1015.09)、(5371.00±55.87),差异有统计学意义(P㩳0.05)。结论:1.JAK2 V617F阳性HEL细胞和PV患者造血细胞存在较高的基础自噬水平:JAK2 V617F阳性HEL细胞内LC3-Ⅱ蛋白表达较JAK2 V617F阴性K562细胞明显增加;JAK2 V617F阳性PV患者外周血细胞内LC3-Ⅱ蛋白表达表达明显高于健康体检者外周血细胞。2.上调自噬活性可促进JAK2 V617F阳性HEL细胞和PV患者骨髓细胞的增殖;下调自噬活性对JAK2 V617F阳性HEL细胞和PV患者骨髓细胞的增殖有明显抑制作用。3.自噬异常是真性红细胞增多症发生发展的病理生理学机制之一,自噬调控可能是PV治疗的新靶点。
【关键词】：自噬 真性红细胞增多症 JAK2 V617F突变 细胞增殖
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R558.3;R733
【目录】：
- 中文摘要5-8
- 英文摘要8-12
- 常用缩写词中英文对照表12-13
- 前言13-15
- 1 材料与方法15-22
- 1.1 实验材料15-17
- 1.2 实验方法17-22
- 2 结果22-29
- 2.1 JAK2 V617F+HEL细胞自噬活性的检测22-23
- 2.2 自噬调控对JAK2 V617F+HEL细胞内LC3-Ⅱ蛋白表达的影响23-24
- 2.3 JAK2 V617F+PV患者造血细胞自噬活性的检测24-25
- 2.4 自噬调控对JAK2 V617F+PV患者骨髓细胞内LC3-Ⅱ表达的影响25-26
- 2.5 自噬活性改变对JAK2 V617F+HEL细胞增殖活力的影响26-27
- 2.6 自噬活性改变对JAK2 V617F+PV患者骨髓细胞增殖活力的影响27-29
- 3 讨论29-32
- 4 结论32-33
- 参考文献33-35
- 综述35-48
- 参考文献43-48
- 致谢48-49
- 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果49-50
- 个人简历50
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 叶青;郑民华;;自噬的分子机制与病理生理意义[J];国际病理科学与临床杂志;2007年04期
2 何韬;王海杰;谭玉珍;;自噬在细胞存活和死亡中的作用[J];生理科学进展;2008年01期
3 张志才;邵增务;;自噬分子机制的研究进展[J];现代生物医学进展;2008年01期
4 赵勇;师长宏;伍静;张海;;自噬的形态特征及分子调控机制[J];中国比较医学杂志;2010年10期
5 王梅;李庆林;;自噬与癌症的治疗[J];安徽医药;2010年08期
6 伍静;赵勇;师长宏;张海;;自噬的形态特征及分子调控[J];现代生物医学进展;2010年20期
7 王雄;谭璐;;自噬研究进展[J];亚太传统医药;2010年10期
8 卞龙艳;;运动与自噬的关系进展研究[J];齐齐哈尔医学院学报;2011年07期
9 王伟;徐忠东;陶瑞松;;肿瘤发生过程中自噬与凋亡关系的研究[J];合肥师范学院学报;2011年06期
10 王光辉;;自噬与疾病[J];生物化学与生物物理进展;2012年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 韦雪;漆永梅;张迎梅;;镉、活性氧自由基与自噬发生的分子机制[A];中国活性氧生物学效应学术会议论文集（第一册）[C];2011年
2 秦正红;粱中琴;陶陆阳;黄强;刘春风;蒋星红;倪宏;邢春根;;自噬在细胞生存与死亡中的作用[A];中国药理学会第九次全国会员代表大会暨全国药理学术会议论文集[C];2007年
3 秦正红;;自噬与肿瘤和神经细胞生存——药物作用的新靶位[A];全国生化与分子药理学药物靶点研讨会论文摘要集[C];2008年
4 李芹;丁壮;;自噬功能研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集[C];2013年
5 胡晨;张璇;滕衍斌;胡海汐;周丛照;;家蚕中自噬相关蛋白Atg8的结构研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2009年学术交流会论文摘要汇编[C];2009年
6 陈希;李民;Xiao-Ming Yin;李林洁;;通过不同途径诱导自噬的化合物对Atg9的依赖性不同[A];细胞—生命的基础——中国细胞生物学学会2013年全国学术大会·武汉论文摘要集[C];2013年
7 陈涓涓;敬静;蔡元博;张俊龙;;针对活体细胞自噬行为的发光金属配合物的设计[A];中国化学会第28届学术年会第8分会场摘要集[C];2012年
8 宁晓洁;钟自彪;王彦峰;付贞;叶启发;;缺血再灌注诱导小鼠肝细胞自噬[A];2013中国器官移植大会论文汇编[C];2013年
9 吴晓琦;李丹丹;邓蓉;江山;杨芬;冯公侃;朱孝峰;;CaMKKβ磷酸化Beclin 1调控自噬及其在肿瘤治疗中的作用[A];2011医学科学前沿论坛第十二届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2011年
10 周鸿雁;裴中;陈杰;申存周;钱浩;刘妍梅;冼文彪;郑一帆;陈玲;;线粒体动力改变参与了LRRK2突变导致的自噬[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前3条
1 生命学院;俞立课题组在《科学》发文揭示自噬调控的重要机制[N];新清华;2012年
2 周飞 张粹兰;花榈木“自噬”可抗癌[N];广东科技报;2011年
3 张明永;水稻自噬基因研究取得新进展[N];广东科技报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 贾盛楠;转录因子p8调控自噬的功能研究[D];浙江大学;2015年
2 皮会丰;DNM1L蛋白介导的线粒体自噬在镉致肝脏毒性中的作用研究[D];第三军医大学;2015年
3 李倩;miRNAs介导的自噬抑制在类鼻疽杆菌感染免疫逃逸中的作用机制研究[D];第三军医大学;2015年
4 黎炳护;激活TRPV1诱导自噬在血管平滑肌细胞泡沫化中作用及机制研究[D];第三军医大学;2015年
5 陈江伟;自噬在椎间盘退变中的作用及机制研究[D];上海交通大学;2014年
6 易聪;乙酰化在自噬过程中的功能和分子机制的研究[D];清华大学;2012年
7 张艳林;自噬在氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞损伤中的作用及其机制探讨[D];苏州大学;2010年
8 陈英;自噬与凋亡分子水平相关关系的探讨[D];第一军医大学;2001年
9 徐秋林;自噬在心肌缺血—再灌注损伤中的不同作用[D];南方医科大学;2012年
10 潘耀柱;抑制自噬增加阿霉素对骨髓瘤细胞的促凋亡活性[D];第四军医大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 匡红;Jnk2通过smARF的降解来调控压力诱导的线粒体自噬及组织损伤[D];浙江理工大学;2015年
2 洪永桃;自噬在类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中的作用及甲氨蝶呤对自噬的影响[D];川北医学院;2015年
3 李宁;自噬在吗啡心肌保护中的作用及机制研究[D];河北联合大学;2014年
4 刘冰;脑缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注后自噬及凋亡的影响[D];河北联合大学;2014年
5 王存凯;microRNA-30a-5p通过抑制自噬阻止肝星状细胞激活[D];河北医科大学;2015年
6 张宇程;泛素连接酶HOIL-1L在线粒体自噬中的功能与机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2015年
7 唐芙蓉;自噬对奶山羊雄性生殖干细胞生物学特性的影响[D];西北农林科技大学;2015年
8 陈军童;肾损伤分子1对高糖诱导人肾小管上皮细胞自噬作用的影响[D];郑州大学;2015年
9 包勇;Kap1在LBH589诱导的乳腺癌细胞MCF-7自噬形成中的作用[D];复旦大学;2013年
10 魏园玉;P53缺失型HL-60白血病细胞内Nucleostemin下调对mTOR通路介导的自噬活性的影响[D];郑州大学;2015年
，本文编号：1107914
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/1107914.html
