MIF通过ERK信号通路对肝癌细胞增殖的实验研究

发布时间：2017-10-29 07:25

  本文关键词：MIF通过ERK信号通路对肝癌细胞增殖的实验研究

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【摘要】：目的:从细胞层面上研究MIF通过ERK信号途径促进肝癌细胞增殖的分子机制,为进一步研发以MIF为靶点治疗HCC的药物研发建立理论基础。方法:首先,将MIF(50 ng/ml,100 ng/ml,200 ng/ml)加入肝癌细胞HepG2作为实验组,MIF(50 ng/ml,100 ng/ml,200 ng/ml)加入肝硬化细胞QSG-7701和正常肝细胞L-02中作为对照组,将MIF拮抗剂ISO-1(50μM)加入肝癌细胞HepG2中作为阴性对照组,各组细胞设一组空白对照组,只加入培养基。通过MTT法检测HepG2细胞存活率来筛选MIF最佳浓度。其次,培养各组细胞24 h后收集细胞,用Real time-PCR检测各组细胞ERK基因表达,用Western-blot法检测各组细胞ERK蛋白表达及其磷酸化水平(p-ERK)。结果:1.MIF具有明显促进细胞增殖作用,在HepG2作用最为显著;2.MTT法可得出在同一时间,随着浓度升高MIF促增殖作用逐渐增强,浓度为200ng/ml时细胞增殖最显著,在HepG2作用更为显著;3.Real time-PCR检测结果可见与对照组相比,ERK基因表达量是上调的,在MIF浓度最大时(200 ng/ml)ERK基因的表达与低浓度组及对照组相比增多最为显著(P0.05),HepG2与QSG-7701、L-02比较差异均有统计学意义(P0.05),QSG-7701与L-02比较差异无统计学意义(P0.05)。Western-blot结果提示不同浓度MIF组ERK蛋白表达无明显差异,而p-ERK的表达是上调的,其中MIF浓度为200 ng/ml时p-ERK蛋白表达较低浓度组及对照组明显增多(P0.05),HepG2与QSG-7701、L-02比较差异均有统计学意义(P0.05),QSG-7701与L-02比较差异无统计学意义(P0.05);4.ISO-1通过抑制MIF表达,下调ERK信号通路蛋白表达,抑制HepG2细胞增殖,Real time-PCR检测显示与MIF组相比,ERK基因表达量下调差异有统计学意义(P0.05)。Western-blot结果提示ISO-1组与MIF组及对照组比较,ERK蛋白表达量无明显差异(P0.05),而p-ERK蛋白表达下调并差异有统计学意义(P0.05)。结论:MIF能够促进HepG2细胞增殖,并且是通过ERK信号通路发生磷酸化促进肝癌细胞增殖的。
【关键词】：巨噬细胞移动抑制因子 细胞外信号调节蛋白激酶 肝癌细胞 增殖
【学位授予单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 中英文缩略对照词表8-9
• 前言9-11
• 立题依据11-13
• 实验研究13-32
• 1. 材料13-16
• 1.1 主要仪器13-14
• 1.2 主要试剂与材料14-16
• 1.2.1 试剂与材料14-15
• 1.2.2 配制实验试剂15-16
• 2. 方法16-22
• 2.1 细胞培养16-17
• 2.1.1 细胞复苏16
• 2.1.2 细胞传代16-17
• 2.1.3 细胞计数17
• 2.2 MTT法测细胞存活率并筛选MIF最佳浓度17-18
• 2.3 Real time-PCR检测ERK基因表达18-20
• 2.3.1 提取细胞中总RNA18
• 2.3.2 RNA纯度检测18-19
• 2.3.3 RNA的反转录19
• 2.3.4 对目的基因进行PCR扩增反应19-20
• 2.4 Western-blot测ERK、p-ERK蛋白表达20-22
• 2.4.1 提取细胞中总蛋白20
• 2.4.2 蛋白BCA定量20-21
• 2.4.3 Western-blot检测ERK、p-ERK蛋白表达21-22
• 2.5 统计学方法分析22
• 3. 结果22-29
• 3.1 MTT法检测HepG2细胞存活率，筛选MIF促增殖作用最佳浓度22
• 3.2 ERK基因的检测22-25
• 3.3 ERK、p-ERK蛋白的检测25-29
• 4. 讨论29-32
• 结论32-33
• 参考文献33-39
• 综述39-49
• 参考文献44-49
• 致谢49-50
• 攻读硕士学位期间的研究工作与成果50

【参考文献】

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本文编号：1112012