慢病毒介导BMPR Ⅱ基因沉默对人肝癌移植瘤生长的影响

发布时间：2017-10-29 10:26

  本文关键词：慢病毒介导BMPR Ⅱ基因沉默对人肝癌移植瘤生长的影响

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【摘要】：目的:探讨BMPR II基因RNA干扰(RNAi)的重组慢病毒载体对人肝癌HepG2细胞裸鼠移植瘤BMPR II基因表达和移植瘤生长的影响。方法:1、前期研究已明确了具有下调BMPR II基因的siRNA干扰序列,设计并合成shRNA oligo,退火后构建入干扰慢病毒载体p L/shRNA/F-BMPR II,用构建的慢病毒载体p L/shRNA/F-BMPR II转染293T细胞,包装慢病毒,并用荧光法测定滴度,用包装的pL/shRNA/F-BMPR II干扰慢病毒侵染HepG2细胞。2、通过实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、蛋白印迹(Western Blot)技术检测慢病毒转染后各组细胞中BMPR II mRNA及蛋白水平表达的变化,明确处理后BMPR II沉默的效果。3、建立人肝癌HepG2细胞裸鼠移植瘤模型,随机分成实验组、阴性对照组和空白对照组。隔天1次向各组动物肿瘤内分别注射BMPR II shRNA慢病毒颗粒、携带无效序列的慢病毒颗粒和0.9%氯化钠溶液0.2 ml,共5次,测量各组肿瘤体积的大小,绘制肿瘤生长曲线,13天后处死裸鼠。4、应用Western blot及免疫组化技术检测移植瘤中BMPR II蛋白水平表达。结果:1、qRT-PCR及Western bolt检测结果显示:转染组与空白对照组及阴性对照组相比,BMPR II mRNA及蛋白表达水平明显下调,差异有统计学意义(P0.05)。2、绘制裸鼠移植瘤生长曲线显示,与空白对照组和阴性对照组相比,实验组肿瘤生长速度明显减慢(P0.05);空白对照组和阴性对照组相比,差异无统计学意义(P0.05)。空白对照组和阴性对照组剥脱的瘤体体积分别为(1274.6±133.02)mm3和(1255.2±130.05)mm3,而实验组剥脱的瘤体体积为(328.6±87.72)mm33、Western blot及免疫组化技术检测显示:实验组与空白对照组及阴性对照组相比,移植瘤组织BMPR II蛋白表达明显下降,差异有统计学意义(P0.05),而空白对照组和阴性对照组移植瘤组织相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论:1、BMPR II shRNA慢病毒载体转染入人肝癌HepG2细胞后,可有效抑制BMPR-ⅡmRNA及蛋白在细胞内的表达。2、BMPR II shRNA慢病毒载体瘤内注射可抑制人肝癌HepG2细胞裸鼠移植瘤的生长。
【关键词】：慢病毒载体 RNA干扰 BMPR II 肝癌HepG2细胞 移植瘤
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 材料与方法13-32
• 2.1 研究所需材料13-17
• 2.1.1 细胞株13
• 2.1.2 裸鼠13
• 2.1.3 主要试剂13-14
• 2.1.4 自配试剂14-16
• 2.1.5 主要仪器设备16-17
• 2.2 实验方法17-32
• 2.2.1 器材的准备17
• 2.2.2 细胞培养17-19
• 2.2.3 细胞转染19-22
• 2.2.4 qRT-PCR分析转染后目的基因的表达22-26
• 2.2.5 Western blot检测转染后各组细胞中BMPR Ⅱ蛋白的表达情况26-29
• 2.2.6 裸鼠移植瘤实验29-30
• 2.2.7 Western bolt检测裸鼠移植瘤中BMPR Ⅱ蛋白的表达情况30
• 2.2.8 免疫组化检测裸鼠移植瘤中BMPR Ⅱ蛋白表达30-31
• 2.2.9 统计学分析31-32
• 第3章 结果32-37
• 3.1 稳转效率检测32
• 3.2 定量qRT -PCR检测慢病毒载体BMPR Ⅱ mRNA干扰效率32-33
• 3.3 Western blot检测慢病毒载体BMPR Ⅱ蛋白干扰效率33-34
• 3.4 人肝癌G2细胞裸鼠移植瘤生长情况34-35
• 3.5 Western blot检测裸鼠移植瘤组织内BMPR Ⅱ蛋白的表达情况35
• 3.6 免疫组化结果35-37
• 第4章 讨论37-42
• 第5章 结论与展望42-43
• 5.1 结论42
• 5.2 展望42-43
• 致谢43-44
• 参考文献44-46
• 攻读学位期间的研究成果46-47
• 综述47-53
• 参考文献51-53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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2 吴建兵;傅华群;刘安文;张吉翔;;RNA干扰抑制BMP-2基因表达对人肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响[J];肿瘤防治研究;2010年05期

3 吴建兵;傅华群;刘安文;黄龙璋;张吉翔;;BMP-2对人肝癌SMMC7721细胞MMP-2、MMP-9表达的影响[J];实用医学杂志;2010年04期

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本文编号：1112609