人重组IL-17D上调上皮性卵巢癌SKOV3细胞sMICA的机制

发布时间：2017-10-30 00:16

  本文关键词：人重组IL-17D上调上皮性卵巢癌SKOV3细胞sMICA的机制

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【摘要】：目的:通过检测不同浓度的人重组IL-17D对人卵巢癌SKOV3细胞的体外生长的作用,检测细胞上清液中可溶性MHCI类链相关蛋白A(MHC class I-related protein A,s MICA)分子表达的变化和基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP9)、NF-κB活化形式P-p65及未活化的p65的表达情况,初步探讨白介素-17D(serum Interleukin-17D,IL-17D)对SKOV3细胞s MICA的调控作用及机制。为研究上皮性卵巢癌的免疫逃逸及诊疗提供依据。方法:1体外培养人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞SKOV3,37℃,5%CO2的恒温培养箱中连续传代培养并冻存,于倒置显微镜下观察细胞形态。2选取处于对数生长期的SKOV3细胞,以每孔1×106/ml密度接种于六孔培养板中,以不同溶度(10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)的人重组IL-17D共培养24h后,并设空白对照组。收集细胞上清液,并于倒置显微镜下观察细胞形态。3用ELISA方法检测细胞上清液中s MICA的表达。4提取SKOV3的RNA,利用real-time PCR在RNA水平检测MMP9的表达情况。5以50 ng/m L的Rh IL-17D作用SKOV3细胞24 h后,用Western blot方法检测MMP9、NF-κB活化形式P-p65和未活化的p65的表达。6检测SKOV3+Rh IL-17D(50 ng/m L)及SKOV3+Rh IL-17D(50ng/m L)+NF-κB的抑制剂helenalin组中MMP9的表达。结果:1 Rh IL-17D对SKOV3细胞体外生长的影响:在细胞培养液中加入不同浓度的Rh IL-17D作用24 h,显微镜观察细胞生长状态,发现50ng/ml浓度时促进细胞增长最明显。2 ELISA方法结果显示,Rh IL-17D对卵巢癌细胞上清s MICA含量的影响:各组细胞上清液中s MICA的表达水平用?X±s表示,SKOV3+Rh IL-17D(50 ng/m L)组s MICA的水平(176.91±6.04)pg/ml明显高于0、10、100组(162.09±11.28)pg/ml,(165.91±8.12)pg/ml,(166.64±10.00)pg/ml,差别有统计学意义(P0.05),Rh IL-17D对卵巢癌SKOV3细胞上清中s MICA的表达增加呈溶度依赖性,以50ng/ml时增加最明显(F=5.359,P0.05)。3实时定量PCR检测MMP-9 m RNA表达,MMP-9的相对表达量用2-△△CT表示,结果用?X±s表示,结果发现Rh IL-17D可以增加SKOV3细胞MMP-9 m RNA表达。SKOV3+Rh IL-17D(50 ng/m L)组MMP9的相对表达量约是SKOV3组的170倍,两者相比差别有统计学意义(P0.05)。4 Rh IL-17D对卵巢癌细胞MMP9及P-p65表达的影响:Western blot分别检测总蛋白MMP9、p65及核蛋白P-p65的表达,空白对照组MMP9、P-p65及p65蛋白表达量分别为0.621±0.110、0.528±0.121、0.810±0.01,50 ng/m LRh IL-17D组上述三种蛋白表达量分别为0.760±0.100、0.830±0.100、0.790±0.01,两组相比差别有统计学意义(P0.05)。SKOV3+Rh IL-17D(50 ng/m L)及SKOV3+Rh IL-17D(50 ng/m L)+50ng/ml+NF-κB的抑制剂helenalin组中MMP9的表达量分别为0.338±0.002、0.692±0.003、0.556±0.003,三组差别具有统计学意义(P0.05)。结论:IL-17D明显促进人上皮性卵巢癌细胞生长,能增加s MICA,可能与其活化NF-κB-MMP-9信号通路有关。
【关键词】：卵巢癌 白介素-17D MMP9 可溶性MICA m MICA 免疫逃逸
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 英文缩写8-9
• 前言9-10
• 材料与方法10-20
• 结果20-21
• 附图21-24
• 附表24-26
• 讨论26-29
• 结论29-30
• 参考文献30-33
• 综述 关于基质金属蛋白酶9的研究进展33-44
• 参考文献38-44
• 致谢44-45
• 个人简历45

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本文编号：1115275