Th22细胞在肝癌恶性腹水中募集和分化机制的研究

发布时间：2017-10-31 18:22

  本文关键词：Th22细胞在肝癌恶性腹水中募集和分化机制的研究

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【摘要】：目的：研究辅助性T淋巴细胞-22(Th22)细胞在恶性腹水(MA)及同源外周血中的分布情况及其表型特征,探讨Th22细胞在肝癌微环境中的分化过程和其募集浸润至腹腔积液的机制。方法：使用标准腹腔穿刺取得37例肝癌并发恶性腹水患者腹腔积液800m1,并同时抽取外周血标本15m1,纳入病例均不曾接受抗肿瘤治疗,未使用糖皮质激素和甾体类抗炎药。抽取10例健康对照者15m1外周血,使用密度梯度离心法获得淋巴细胞并立即检测T细胞亚群Th17、Th22细胞在MA和外周血中的分布比例。使用人抗CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR10、 CD45RA、CD45R0、CD62L单克隆抗体对Th22细胞膜表面染色标记,破膜剂破膜后使用抗IL-22、抗IL-17和IFN-γ单克隆抗体对Th22细胞内抗原做荧光染色标记。使用Naive CD4+T细胞磁珠分选试剂盒从MA和外周血中阴性分选出CD4+T细胞,24孔板中单独或组合加入外源性细胞因子：TNF-α(50ng/ml)、IFN-γ(50ng/ml)、IL-1β (20ng/ml)、IL-6(100 ng/ml),在37℃、5%CO2下培养7d后进行细胞内IL-22染色,上流式细胞仪检测各组Th22细胞比例,TNF-αIL-6条件下刺激7组初始CD4+T细胞分化,37℃、5%CO2条件培养0～7天,每天检测一组Th22细胞比例；在TNF-α50 ng/ml浓度下,向5组初始CD4+T细胞中加入5种不同浓度(Ong/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml)刺激,7d后流式细胞仪检测Th22细胞比例。在外周血中提取初始CD4+T细胞,加入趋化小室上层,下层加入离心提取冻存的MA上清液,培养后收集下层小室细胞并对其进行细胞内IL-22染色,流式细胞术检测Th22细胞比例。将外周血中分选出的初始CD4+T细胞加入上层趋化小室。在下层加入之前离心提取冻存的MA上清液并置于37℃、5%C02培养箱中3h。收集下层小室细胞并对其进行细胞内IL-22染色,使用流式细胞仪分析。部分实验组加入抗CC类趋化因子20(CCL20)、抗CCL22、抗CCL27单克隆抗体100 ng/ml,或三者组合以期阻断趋化效应,使用流式细胞仪分析Th22比例,计算趋化指数。结果：MA中Th22细胞的比例(3.22%±0.4%,n=37)明显高于对应外周血(0.79%±0.2%,n=37,P0.01)和健康对照组(0.63%±0.11%,n=10,P0.01),Thl7细胞在MA中比例(3.30%±0.18%)也明显高于对应外周血(0.79%±0.15%,n=37,P0.01)及健康对照组(0.67±0.12%,n=10,P0.01),且两种细胞比例呈正相关(P0.01)。MA和外周血中的Th22细胞表达CD45RA(10.51%±0.72%vs 18.20%±0.78%,P0.01)、CD62L(7.05%±0.49%vs 13.66%±0.68%,P0.01)、CCR3(5.77%±0.50%vs5.51%±0.53,P0.05)、CCR5(9.21%±0.82%vs10.84%±0.71,P0.01)水平较低,CD45R0(83.34%±0.96%vs80.08%±1.14%,P0.01)、表达水平较高。较高水平表达CCR4(72.48% ±1.74%vs68.70%±1.61,P0.05).CCR6(83.88%±1.68%vs85.61%±1.61, P0.05).CCR10(88.13%±1.24%vs89.23%±1.31,P0.05),CCR7为(52.61%±2.67%vs42.33%±2.44%,P0.05)。CD4+T细胞向Th22细胞分化过程中,白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α).IL-1β起促进分化作用,干扰素-γ(IFN-γ)起抑制分化作用,且Th22细胞受IL-6的促分化作用呈现时间剂量依赖规律。MA上清液对外周血Th22细胞有明显的趋化效应,加入抗CCL20、抗CCL22、抗CCL27单克隆抗体则明显阻断此趋化作用。结论：MA中的趋化因子与炎症细胞因子在腹膜腔内共同作用使得MA中Th22细胞比例明显高于外周血,Th22细胞可能参与MA的发病过程并发挥一定的免疫调节作用。
【关键词】：Th22细胞 肝癌 恶性腹水 趋化 分化
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 个人简历3-5
• 英文缩略词汇对照表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-15
• 材料与方法15-22
• 结果22-30
• 讨论30-36
• 结论36-37
• 参考文献37-45
• 综述-CD4~+T细胞亚群的分化调节及其对消化系统肿瘤免疫作用研究的新进展45-63
• 参考文献55-63
• 致谢63-64
• 攻读学位期间发表的学术论文64

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本文编号：1123232