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IL-17F在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞生物学特性的影响

发布时间:2017-11-02 01:13

  本文关键词:IL-17F在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞生物学特性的影响


  更多相关文章: 胃癌 IL-17F IL-17R STAT3 侵袭 迁移


【摘要】:目的:检测IL-17F在胃癌中的表达,探讨IL-17F促进胃癌进展的作用机制。方法:1采用RT-PCR和western-blot方法分别检测IL-17Fm RNA和蛋白在胃癌患者癌组织和癌旁对照组织中的表达,分析其与胃癌患者临床病理参数之间的关系。2采用MTT法,检测不同浓度外源性IL-17F(1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、200ng/ml)对SGC7901细胞的增殖活性的影响。3用RT-PCR和western-blot方法检测IL-17F si RNA基因沉默后SGC-7901细胞中IL-17F的m RNA和蛋白表达情况。4采用western-blot分别检测:沉默IL-17R基因后,IL-17F作用SGC7901细胞后空载体转染组、转染组中细胞STAT3的表达情况;阻断TPL2活性后,IL-17F作用SGC7901细胞后,细胞STAT3表达的情况。5采用细胞划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测,IL-17R基因沉默前后和TPL2抑制剂TKI处理前后,IL-17F对SGC7901细胞迁移能力和侵袭能力的影响。6采用ELISA法检测,IL-17R基因沉默前后和TPL2抑制剂TKI处理前后,IL-17F对SGC7901细胞分泌IL-6、IL-8和VEGF的影响。结果:1 RT-PCR实验结果显示,与癌旁对照组织相比,胃癌组织内IL-17F、VEGF和IL-6 m RNA表达显著增高(0.6286±0.2448 vs 0.1553±0.0286、0.2965±0.0527vs 0.1438±0.0295、0.4555±0.1897 vs 0.2357±0.0695)并且IL-17F m RNA表达水平与VEGF和IL-6 m RNA表达水平明显相关(P0.01)。2 Western-blot实验结果显示,与癌旁对照组织相比,胃癌组织内IL-17F蛋白表达显著增高(0.3861±0.1978 vs 0.1347±0.0563)(P0.05)。3直线相关分析结果显示,胃癌组织内IL-17F m RNA和蛋白表达水平与患者TNM分期明显相关,而与患者的性别、年龄和肿瘤大小无相关性。4 MTT实验结果显示,不同浓度(1ng/ml,10ng/ml,100ng/ml,200ng/ml)IL-17F作用24h,对SGC7901细胞的体外增殖活性无明显影响,差异无统计学意义。5 IL-17R si RNA基因转染后,SGC7901细胞IL-17R表达将IL-17R si RNA重组质粒转染SGC7901细胞后,检测IL-17R表达,结果显示,与转染空载体组相比,转染IL-17R si RNA质粒的SGC7901细胞中表达水平明显降低6沉默IL-17R基因后IL-17F对SGC7901细胞迁移能力的影响将IL-17R si RNA重组质粒转染SGC7901细胞后,检测IL-17F对细胞迁移能力的影响,结果显示,与转染空载体组相比,转染IL-17R si RNA的SGC7901细胞经IL-17F处理后,向划痕中间迁移的距离明显缩小,差异有统计学意义。7沉默IL-17R基因后IL-17F对SGC7901细胞侵袭能力的影响将IL-17R si RNA重组质粒转染SGC7901细胞后,检测IL-17F对细胞侵袭能力的影响,结果显示,与转染空载体组相比,转染IL-17R si RNA的SGC7901细胞经IL-17F处理后,穿膜细胞数明显减少,差异有统计学意义。8沉默IL-17R基因后IL-17F对SGC7901细胞STAT3表达的影响将IL-17R si RNA重组质粒转染SGC7901细胞后,检测IL-17F对细胞STAT3表达的影响,结果显示,与转染空载体组相比,转染IL-17R si RNA的SGC7901细胞经IL-17F处理后,磷酸化STAT3蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义。9沉默IL-17R基因后IL-17F对SGC7901细胞分泌细胞因子的影响将IL-17R si RNA重组质粒转染SGC7901细胞后,检测IL-17F对SGC7901细胞分泌细胞因子的影响,结果显示,与转染空载体组相比,转染IL-17R si RNA的SGC7901细胞经IL-17F处理后,SGC7901细胞培养上清中IL-6、IL-8、VEGF的分泌水平明显降低,差异有统计学意义。10阻断TPL2活性后,IL-17F对SGC7901细胞迁移能力的影响。采用10μmol/LTKI处理SGC7901细胞后,细胞划痕实验检测IL-17F对SGC7901细胞迁移能力的影响,结果显示,与对照组相比,TKI处理组细胞经IL-17F作用后向划痕中央迁移的距离明显缩小。(560.8±13.274vs836±12.227),差异有统计学意义。11阻断TPL2活性后IL-17F对SGC7901细胞侵袭能力的影响采用10μmol/LTKI处理SGC7901细胞后,transwell实验检测IL-17F对SGC7901细胞侵袭能力的影响,结果显示,与对照组相比,TKI处理组细胞经IL-17F作用后SGC7901细胞穿膜细胞数明显减少(117±11.8321vs222.4±28.8756),差异有统计学意义。12阻断TPL2活性后IL-17F对SGC7901细胞STAT3表达的影响采用10μmol/LTKI处理SGC7901细胞后,western-blot实验检测IL-17F对SGC7901细胞STAT3表达的影响,结果显示,与对照组相比,TKI处理组细胞经IL-17F作用后,磷酸化STAT3表达水平明显降低。13阻断TPL2活性后IL-17F对SGC7901细胞分泌细胞因子的影响采用10μmol/LTKI处理SGC7901细胞后,ELISA实验检测IL-17F对SGC7901细胞分泌细胞因子的影响,结果显示,与对照组相比,TKI处理组细胞经IL-17F作用后,SGC7901细胞培养上清中IL-6、IL-8和VEGF的分泌水平(分别为171.9±9.5vs129.8±9.35,324.5±11.82vs301.3±12.37,448.1±13.55vs400±9.63pg/ml)显著降低,差异有统计学意义。结论:1胃癌组织内IL-17F表达量增高并与患者TNM分期相关,提示IL-17F可能促进胃癌的进展。2胃癌组织中IL-17F表达量增高与VEGF和IL-6表达量增高明显相关,提示IL-17F可能通过上调IL-6和VEGF的表达促进胃癌的进展。3外源性IL-17F可能通过细胞表面的IL-17R作用于TPL2-STAT3信号通路,诱导胃癌细胞迁移、侵袭和分泌IL-6、IL-8和VEGF,促进胃癌的进展。
【关键词】:胃癌 IL-17F IL-17R STAT3 侵袭 迁移
【学位授予单位】:河北医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R735.2
【目录】:
  • 中文摘要5-8
  • 英文摘要8-12
  • 英文缩写12-13
  • 引言13-15
  • 第一部分IL-17F在胃癌组织中的表达15-33
  • 前言15
  • 材料与方法15-21
  • 结果21-22
  • 附图22-25
  • 附表25-27
  • 讨论27-28
  • 小结28
  • 参考文献28-33
  • 第二部分IL-17F对胃癌细胞生物学特性的影响及其机制研究33-61
  • 前言33
  • 材料与方法33-42
  • 结果42-45
  • 附图45-55
  • 附表55-57
  • 讨论57-59
  • 小结59
  • 参考文献59-61
  • 结论61-62
  • 综述IL-17F的信号传导机制及其与疾病的关系62-71
  • 参考文献66-71
  • 致谢71-72
  • 个人简历72

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 彭波;李华;王育斌;;结直肠癌患者癌组织中IL-17A和IL-17F的表达及意义[J];武汉大学学报(医学版);2013年03期

2 张平;张蓉;周小勇;;IL-17F在银屑病皮损中的表达及意义[J];中国皮肤性病学杂志;2010年01期



本文编号:1129329

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