青岛地区淋巴瘤中EB病毒编码基因EBNA1多态性研究

发布时间：2017-11-02 09:23

  本文关键词：青岛地区淋巴瘤中EB病毒编码基因EBNA1多态性研究

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【摘要】：目的EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)与人类淋巴瘤的发生密切相关,其分布具有一定的地域性和人群倾向性,除环境因素和遗传因素外,是否存在与EBV阳性淋巴瘤相关的EBV基因变异一直是倍受关注。本研究采用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)结合DNA测序技术检测山东青岛地区EBV阳性淋巴瘤组织中EBV核抗原1(Epstein-Barr virus nuclear antigen 1,EBNA1)编码基因序列,旨在探讨EBNA1编码基因序列变异在淋巴瘤发生中的意义,明确其变异是具有地域性抑或肿瘤特异性。方法采用原位杂交技术检测山东省青岛市622例淋巴瘤患者肿瘤组织中EBV编码的小RNA 1(EBV-encoded small RNA 1,EBER1)以筛选EBV阳性淋巴瘤标本,巢式PCR结合DNA测序检测EBV阳性淋巴瘤标本中EBNA1编码基因多态性。应用DNAStar软件对EBNA1编码基因序列检测结果进行对比分析,与EBV标准株序列比较,根据EBNA1蛋白487位氨基酸(AA)的变异情况分型;并根据EBNA3C基因的缺失序列采用PCR技术对EBV阳性淋巴瘤标本进行EBV 1/2分型。结果①622例淋巴瘤中共有110例检测到EBER1阳性信号,阳性率为17.68%。霍奇金淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma,HL)的阳性率为33.33%(35/105),NK/T细胞淋巴瘤的阳性率为78.67%(59/75),弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)的阳性率为1.34%(5/372)和T细胞淋巴瘤的阳性率为15.71%(11/70)。②EBNA1根据其C端487位点氨基酸的变化及其它共有突变可分为5种亚型,本研究共检测到4种亚型,包括V-val变异型,原型P-thr,V-Leu变异型以及P-ala原型,检出率分别为67.3%(74/110),15.5%(17/110),3.6%(4/110)和10.9%(12/110)。③统计学分析显示,4种EBNA1亚型在淋巴瘤组织中的分布无显著性差异(P=0.383);与EBV相关胃癌(EBV-associated gastric carcinoma,EBVaGC)、鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)及健康携带者咽漱液(throat washing,TW)相比,EBNA1亚型的分布也无显著性差异(P0.05)。④4种淋巴瘤组织中1型EBV、2型EBV以及1+2混合型EBV的分布没有显著不同(P=0.089),而淋巴瘤分别与NPC,EBVaGC和TWs比较EBV分型均有显著性差异(P=0.002,P=0.007,P=0.001)。根据EBV 1/2分型将淋巴瘤分为3组,即type1,type2和type1+2,3组中EBNA1亚型V-val,P-thr,V-leu和P-ala的分布没有显著不同(P=0.553)。结论①EBV阳性淋巴瘤标本共检测到V-val,P-thr,V-Leu和P-ala 4种EBNA1亚型,V-val是青岛地区淋巴瘤中最为常见亚型,由于该亚型同时也是亚洲地区最常见的亚型,而此结果与其它地区的相关报道不同,表明V-val亚型呈地域相关性。②青岛地区EBV阳性淋巴瘤、NPC、EBVaGC组织和EBV健康携带者TWs中,以及4种EBV阳性淋巴瘤间EBNA1亚型的分布均无显著性差异,表明EBNA1亚型不具有肿瘤特异性,在淋巴瘤的发生中不具有选择倾向性,进一步支持其地域相关性特点。③与NPC,EBVaGC和TWs不同,EBV阳性淋巴瘤组织中检测到更多1型EBV和2型EBV的共同感染,尤其以T细胞淋巴瘤中较为明显,推测2型EBV可能更易感染初级T细胞,1型EBV和2型EBV混合感染可能具有有协同效应。④淋巴瘤组织中EBV1/2分型与EBNA1亚型之间没有关联性。
【关键词】：EB病毒 人疱疹病毒 EBV核抗原1 基因多态性
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.1
【目录】：

• 摘要2-4
• ABSTRACT4-7
• 前言7-9
• 第一章 材料与方法9-16
• 1.1 仪器、试剂和耗材9-10
• 1.2 标本和细胞10
• 1.3 核酸提取10-12
• 1.4 EBV阳性淋巴瘤标本的筛选12-14
• 1.5 EBNA1编码基因引物设计和DNA扩增14
• 1.6 DNA序列分析14-15
• 1.7 EBV1型和2型的定义15
• 1.8 统计分析15-16
• 第二章 结果16-22
• 2.1 EBV阳性标本鉴定16
• 2.2 EBNA1C末端序列的类型16-19
• 2.3 EBV阳性淋巴瘤组织中EBNA1亚型的分布19-20
• 2.4 EBV 1/2 分型和EBNA1亚型的关系20-22
• 第三章 讨论22-27
• 结论27-28
• 参考文献28-32
• 综述32-64
• 摘要32
• 引言32
• 1. DNA的复制功能32-37
• 2. 有丝分裂隔离功能37-41
• 3. 转录影响41-44
• 4. 细胞永生化和转化44-47
• 5. EBNA1的转化和免疫逃避47-48
• 总结48-49
• 参考文献49-64
• 攻读学位期间的学术成果64-65
• 致谢65-66

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前3条

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中国博士学位论文全文数据库 前4条

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本文编号：1130968