多功能脂质体对前列腺癌骨转移瘤的治疗研究

发布时间：2017-11-03 05:03

  本文关键词：多功能脂质体对前列腺癌骨转移瘤的治疗研究

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【摘要】：目的通过环状精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽(cRGDyk)与脂质体传输系统的连接以及热敏脂质体的构建,探讨多功能脂质体如何提高小鼠前列腺癌骨转移瘤的治疗效果。方法(1)透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM)确定顺铂脂质体(CIS-liposomes和RGD-CIS-liposomes)的形态的大小;动态光散射仪(Dynamic Light Scattering,DLS)确定脂质体的粒径,PDI和zeta电位;高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatograph,HPLC)确定脂质体的包封率,装载率和释放曲线;流式细胞仪(Flow Cytometry,FCM)和激光共聚焦显微镜(Confocal Laser Microscope,CLSM)检测细胞对药物的摄取;MTT法检测不同浓度的药物对RM-1细胞损伤;小鼠尾静脉注射cisplatin,CIS-lipsomes和RGD-CIS-liposomes后,HPLC法检测血液和组织中顺铂的含量;建立小鼠前列腺癌骨髓瘤模型后,通过小动物活体成像系统成像系统(In Vivo Image System,IVIS)检测脂质体在肿瘤部位的聚集情况;小鼠造模后第4,6,8,10,12,14,16,18,20,22,24,26和28天检测小鼠自发痛行为,并每天观察体重的变化;在小鼠造模后的第22天,将小鼠用CT扫描仪检测骨骼病变;尾静脉注射PBS,cisplatin,CIS-lipsomes和RGD-CIS-liposomes 2天,7天和14天后,取出肝和脾进行HE染色。(2)TEM确定热敏脂质体的形态和大小,DLS确定脂质体的粒径,PDI和zeta电位;荧光分光光度计确定脂质体的包封率和释放曲线;MTT法检测细胞活力;根据阿霉素(DOX)的自身荧光确定细胞对药物的摄取;钙黄绿素染活细胞法;尾静脉注射药物7天和14天后,取出心,肝和脾进行HE染色。结果(1)顺铂脂质体为大小均匀的球体;随着脂质体和顺铂比例的降低(顺铂浓度的上升),脂质体的负载率(LE%)增加而包封率(EP%)降低;FCM和CLSM实验结果都表明,脂质体可以被RM-1细胞内化,且cRGDyk修饰的脂质体更容易被细胞内化;MTT结果表明RGD-CIS-liposomes具有更强的细胞毒性;Cisplatin的半衰期短,体内清除率快,药物在肝和脾中聚集的更多,24 h时各组织中cisplatin的含量比2 h低得多,而CIS-liposomes和RGD-CIS-liposomes的浓度几乎没有变化,所以脂质体药物在体内的循环时间较长;IVIS结果表明两种药物都开始在肿瘤部位聚集,但RGD修饰的脂质体在肿瘤部位聚集得更多;PBS,cisplatin,CIS-liposomes和cRGDyk四组之间行为学并没有显著性差异,而RGD-CIS-liposomes与其他四组在第18,20,22天都有显著性差异,在整个实验过程中各组小鼠体重没有明显的变化;CT结果表明RGD-CIS-liposomes可以抑制骨质破坏;给药14天后,cisplatin组的肝组织发生严重病变,CIS-liposomes和RGD-CIS-liposomes组并没有明显的毒性。(2)热敏脂质体在过热的条件下(43℃)下会促进药物的释放;MTT结果显示将光热疗与化疗结合后,对细胞的损伤最强;细胞中药物的释放说明了在过热条件下可以促进药物的释放;钙黄绿素染活细胞法也进一步证明了光热疗结合化疗后对细胞的损伤最强。HE结果显示14天后DOX组肝和心都有严重病变。结论(1)在治疗前列腺癌骨转移瘤的模型中,由于cRGDyk和顺铂的靶向性以及协同抗肿瘤效果,RGD连接的顺铂脂质体能抑制肿瘤生长,缓解疼痛,提高生存率,从而提高其治疗效果。(2)光热疗-化疗能抑制前列腺癌细胞的增殖。
【关键词】：骨转移瘤 RGD肽 脂质体 药物传输
【学位授予单位】：南通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-12
• 第一章 绪论12-15
• 第二章：材料与方法15-27
• 2.1 实验材料15-18
• 2.1.1 实验动物15
• 2.1.2 细胞株15
• 2.1.3 试剂15-16
• 2.1.4 实验仪器16-17
• 2.1.5 溶液的配制17-18
• 2.2 实验方法18-27
• 2.2.1 RGD修饰的顺铂脂质体对骨转移瘤的治疗作用18-24
• 2.2.1.1 脂质体的制备18-19
• 2.2.1.2 脂质体的表征19-20
• 2.2.1.3 细胞培养20-21
• 2.2.1.4 细胞摄取以及脂质体的靶向性能21
• 2.2.1.5 MTT检测细胞活力21-22
• 2.2.1.6 骨转移瘤动物模型22
• 2.2.1.7 药代动力学和组织分布22
• 2.2.1.8 体内近红外荧光成像22-23
• 2.2.1.9 疼痛行为检测23
• 2.2.1.10 计算机断层扫描（CT）评估23
• 2.2.1.11 安全性评估23-24
• 2.2.1.12 数据分析24
• 2.2.2 热敏脂质体对骨转移瘤的光热疗-化疗的协同治疗效果24-27
• 2.2.2.1 DOX-TSL的制备24
• 2.2.2.2 Au NR的制备24
• 2.2.2.3 DOX-TSL和AuNPs的表征24
• 2.2.2.4 DOX-TSL的包封率和释放曲线24-25
• 2.2.2.5 MTT检测细胞活性25
• 2.2.2.6 细胞在不同条件对DOX的摄取25
• 2.2.2.7 钙黄绿素染活细胞法25-26
• 2.2.2.8 安全性评估26
• 2.2.2.9 数据处理与分析26-27
• 第三章 结果27-48
• 3.1 RGD修饰的顺铂脂质体对骨转移瘤的治疗作用27-42
• 3.1.1 脂质体的表征27-30
• 3.1.2 RGD修饰提高脂质体的靶向性30-32
• 3.1.3 cRGDyk修饰能增加脂质体对RM-1 细胞的毒性作用32-33
• 3.1.4 不同药物对药代动力学和组织分布的影响33-36
• 3.1.5 RGD修饰能提高脂质体的体内靶向性36-37
• 3.1.6 不同药物传输系统对前列腺癌骨转移瘤小鼠行为及存活的影响37-40
• 3.1.7 安全性评估40-42
• 3.2 热敏脂质体在细胞水平上能抑制前列腺癌细胞的增殖42-48
• 3.2.1 热敏脂质体的表征42
• 3.2.2 阿霉素脂质体的释放42-43
• 3.2.3 光热疗-化疗能加剧对RM-1 细胞的毒性43-44
• 3.2.4 药物在不同时间点的释放44-45
• 3.2.5 光热疗-化疗能抑制RM-1 细胞的增殖45-46
• 3.2.6 安全性评估46-48
• 第四章 讨论48-51
• 第五章 结论51-52
• 参考文献52-55
• 英文缩词词表55-56
• 综述56-69
• 综述参考文献65-69
• 在攻读硕士学位期间公开发表的论文69-70
• 致谢70

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本文编号：1134718