RNA结合蛋白RNPC1调控乳腺癌ERα表达的机制研究

发布时间：2017-11-05 12:01

  本文关键词：RNA结合蛋白RNPC1调控乳腺癌ERα表达的机制研究

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【摘要】：目的:研究RNA结合蛋白RNPC1在乳腺癌中调节ERα表达的具体机制,并研究ERα反馈调节RNPC1的机制。探讨RNPC1与ERα之间的反馈调节环路的生物学效应以及在乳腺癌内分泌治疗中的意义。材料和方法:用免疫组化的方法检测90例乳腺癌组织中RNPC1和ERα表达情况,并用免疫荧光明确RNPC1和ERα在乳腺癌细胞中的表达定位。运用慢病毒转染法,在乳腺癌细胞株MCF-7、BT474、MDA-MB-231、SUM1315中分别构建RNPC1、ERα的过表达和干扰模型,并用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和Western blot检测转染效率并检测RNPC1和ERα的m RNA和蛋白的表达水平。用放线菌素D分别处理RNPC1过表达(RNPC1)和对照(NC)细胞株,及RNPC1(sh RNPC1)干扰和对照(SCR)细胞株,在各个时间点用q RT-PCR检测剩余的ERα转录子。运用RNA免疫共沉淀(RIP)实验检测RNPC1蛋白ERα的转录子结合,RNA电泳迁移率(REMSA)实验明确RNPC1结合ERα的转录子的结合位点;双荧光素酶报告实验明确这些结合位点的功能。用CCK-8实验检测RNPC1干扰细胞株在雌激素处理之后的增殖能力的变化。MCF-7和BT474细胞,用q RT-PCR和Western blot检测雌激素处理之后,内源性RNPC1和ERα的表达变化。结果:在ERα阳性的乳腺癌组织中,RNPC1的表达明显增加,差别有统计学意义(p0.05)。RNPC1主要在细胞核和细胞质中表达,ERα主要在细胞核中表达。在MCF-7和BT474细胞系中,异源性过表达RNPC1后,ERα的表达明显增多;而RNPC1干扰后,ERα的表达也明显降低。RNPC1干扰与过表达对ERβ的表达无影响。在MDA-MB-231和SUM1315细胞系中RNPC1过表达与干扰对ERα的表达无影响。过表达RNPC1后,ERα的m RNA稳定性增强;干扰RNPC1后,ERα的m RNA稳定性降低。RNPC1能与ERα的m RNA3’端非编码区AU/U富含区域结合。在乳腺癌细胞中过表达ERα能明显降低RNPC1的表达;干扰ERα能增加RNPC1的表达。在雌激素处理下,RNPC1干扰后增殖能力明显增强;内源性的RNPC1表达降低。结论:在乳腺癌组织中RNPC1与ERα的表达存在明显的相关性。RNPC1在细胞核和细胞质中高表达,ERα在细胞核中高表达。异源性过表达RNPC1能增加ERα的表达,干扰RNPC1能减少ERα的表达。RNPC1能与ERα的m RNA的3’端非编码区AU/U富含区域结合并增强其稳定性。异源性过表达ERα能反馈降低RNPC1表达。雌激素能抑制内源性RNPC1的表达。RNPC1与ERα之间的反馈调节环路有望为乳腺癌内分泌治疗和研究提供新的方向。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9

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本文编号：1144063