急性髓系白血病中TFPI-2基因甲基化检测及地西他滨对K562细胞抑制效应的研究

发布时间：2017-11-05 20:25

  本文关键词：急性髓系白血病中TFPI-2基因甲基化检测及地西他滨对K562细胞抑制效应的研究

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【摘要】：目的:检测组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)基因在急性髓系白血病(AML)中甲基化状态,研究去甲基化药物地西他滨对白血病K562细胞TFPI-2基因去甲基化和对K562细胞的抑制效应,为临床上应用地西他滨治疗AML和探寻新的白血病分子治疗靶基因提供实验依据。方法:1.将患者分为初治急性髓系白血病组和缺铁性贫血组,采用特异性甲基化聚合酶链反应(MS-PCR)法检测两组病人TFPI-2基因甲基化状态。2.采用CCK-8法和台盼蓝细胞计数法检测不同浓度地西他滨处理K562细胞不同时间后对细胞增殖的影响。3.采用MS-PCR、RT-PCR、Western-Blot法检测不同浓度地西他滨处理K562细胞后TFPI-2基因甲基化状态、mRNA及蛋白表达的改变。结果:1.TFPI-2基因在急性髓系白血病患者中甲基化阳性率(包括完全甲基化和非完全甲基化)达63.63%(21/33),而对照组缺铁性贫血患者TFPI-2基因均未发生甲基化;差异具有统计学意义(P0.05)。2.CCK-8结果经整体分析发现:不同浓度地西他滨组间比较、时间点比较及浓度组与时间点的交互作用均有统计学意义(P0.05)。进行精细比较发现,同一时间下,k562细胞的存活率随着地西他滨浓度增高呈下降趋势,各浓度组间差异具有统计学意义(p0.05);同一地西他滨浓度,k562细胞的存活率随着地西他滨处理时间的延长呈下降趋势,各时间组间差异具有统计学意义(p0.05)。3.台盼蓝计数法结果的整体分析发现:不同浓度地西他滨组间比较、时间点比较及浓度组与时间点的交互作用均有统计学意义(p0.05)。进行精细比较发现,同一时间下,随着地西他滨作用浓度的增加,各组细胞数呈下降趋势。但地西他滨作用于k562细胞24小时时,各浓度地西他滨组细胞计数相对于未加药组细胞计数差异无统计学意义(p0.05),而不同浓度地西他滨作用于k562细胞48、72小时后,细胞计数随地西他滨浓度的增加而下降,差异有统计学意义(p0.05)。同一地西他滨浓度,各组细胞数随时间的延长均呈上升趋势,各浓度组除24小时细胞计数与0小时比较差异无统计学意义外(p0.05),48小时、72小时的细胞计数皆高于0小时,差异有统计学意义(p0.05)。4.地西他滨处理后k562细胞48小时后,tfpi-2基因出现去甲基化效应,且呈药物浓度依赖性;与此同时,k562细胞tfpi-2基因mrna和蛋白表达增加,表达量相对于未经地西他滨处理组差异具有统计学意义(p0.05)。结论:1.急性髓系白血病中tfpi-2基因常常发生高甲基化。2.k562细胞tfpi-2基因启动子高甲基化是其表达下调的主要原因。3.地西他滨能够逆转k562细胞中tfpi-2基因的高甲基化状态,恢复tfpi-2基因的mrna和蛋白的表达,可能参与抑制k562细胞的增殖。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.71

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本文编号：1145761