原发性肝癌肿瘤标志物的研究

发布时间：2017-11-06 22:38

  本文关键词：原发性肝癌肿瘤标志物的研究

  更多相关文章： 原发性肝癌 肿瘤标志物 生物信息学分析 实时定量PCR

【摘要】：背景肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)作为恶性肿瘤,在我国居于第三位。在易发人群中,早期诊断并发现肝癌,便于较早进行手术治疗,从而提高患者的生存率。目前的肝癌诊断方法主要有影像学方法和血清中肝癌标志物检测的方法。其中影像学方法通常在疾病发展至中晚期才能检测到,对早期肿瘤诊断的概率较低,而且不能定性。目前肝癌的特异标志物主要有甲胎蛋白(alpha fetal protein,AFP)和γ-谷氨酰转移酶(gamma-glutamyl-transferase,GGT)。AFP作为检测指标,可以提高诊断率,但是在胃癌、肝硬化和慢性肝炎中,AFP都有过表达,所以用单一的AFP作为指标对肝癌检测,容易出现假阳性,或者误诊、漏诊等。GGT在多数正常的肝脏、胆中也会表达较高,并且对肝癌的原发性和继发性不能鉴别。因此,开发更多的肝癌特异标志物,对更有效地诊断早期原发性肝癌有积极的临床意义。目的本研究旨在找到原发性肝癌新的肿瘤标志物,为肝癌早期诊断、风险预测及治疗提供理论依据。方法1.从GEO数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)寻找肝癌相关的基因,然后通过David、Passway Studio、NCBI、GENE ONTOLOGY、KEGG、GENMAPP和BIOCARTA等网站的基因分类及信号通路分析,对找出的肝癌相关基因进行分类,最终确定可能与原发性肝癌发生相关的关键基因。2.对17人份肝癌患者的癌组织和癌旁组织样本,用HE染色方法观察细胞的形态学特征,确保取材准确。3.通过实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)、免疫印迹(Western blotting,WB)和免疫组织化学检测方法,研究肝癌相关基因在17人份肝癌患者的癌组织和癌旁组织中的表达变化情况。结果1.本研究从GEO数据库中调取了肝癌组织与癌旁组织全基因组的测序结果,数据库共测出28000多个基因,有1408个基因表达变化有意义。将这些基因在Gene Ontology(GO注释)中作生理活动和分子功能注释分析,表明这些基因主要参与调控细胞增殖、迁移、凋亡等重要的生理活动。再将这批基因通过与KEGG经典信号通路富集分析,数据显示,这些基因在MAPK、Jak-STAT和各种癌症信号通路中都起关键作用。通过GO注释和KEGG Pathway分析,从这批基因中挑选出了VCAM-1、MMP2、MMP9、P53、KIF1B、ARID1A、ERCC3共7个基因作为进一步研究的基因。2.对17例肝癌组织和癌旁组织,通过HE染色的方法从组织学水平确保取材准确。通过qRT-PCR分析上述7个基因的表达变化,结果表明KIF1B、ERCC3这两个基因在肝癌及癌旁组织中表达没有差异;P53、MMP2、VCAM-1、MMP9、ARID1A在肝癌组织中表达高于癌旁组织,差异显著。通过WB实验得到上述样本中相应蛋白的表达水平,得到与qRT-PCR检测一致的结果。进一步的免疫组化结果也表明VCAM-1、MMP2、MMP9、ARID1A、P53在肝癌组织中表达高于癌旁组织。结论VCAM-1、MMP2、MMP9、ARID1A、P53这几个基因可以作为潜在的原发性肝癌早期诊断肿瘤标志物,从而为HCC的确诊提供帮助。
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7

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本文编号：1149712