MTA2在食管癌组织中的表达调控及其功能机制的研究

发布时间：2017-11-14 13:39

  本文关键词：MTA2在食管癌组织中的表达调控及其功能机制的研究

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【摘要】：目的:研究转移相关基因2(MTA2)在食管癌组织中的表达及调控,和对食管癌细胞体内外增殖、迁移和侵袭能力的影响,并探讨MTA2促进食管癌细胞发生EMT转变的可能机制。方法:1应用实时荧光定量PCR法检测正常食管上皮组织、癌旁组织和癌组织中MTA2、Sp1、mi R146A、mi R149、mi R34A的表达,并分析MTA2与Sp1、mi R146A、mi R149、mi R34A表达水平的相关性,同时分析MTA2的表达水平与食管癌患者临床病理参数的相关性。2应用western blot和免疫组织化学法检测正常食管上皮组织和食管癌组织中MTA2蛋白的表达。3应用MTS法,Transwell迁移和侵袭实验检测过表达或敲低MTA2对食管癌细胞增殖活性、迁移和侵袭能力的影响。4应用实时荧光定量PCR法检测过表达或敲低MTA2后对EMT相关基因表达水平的影响。5应用western blot法检测过表达或敲低MTA2后对EMT相关蛋白表达水平的影响。6应用细胞免疫荧光法检测敲低MTA2后对EMT相关蛋白表达水平的影响。7应用免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)实验检测MTA2能否与Twist相结合。8应用实时荧光定量PCR法和western blot检测正常食管上皮组织及癌组织中e IF4E的基因和蛋白表达水平。9应用Transwell迁移和侵袭实验及western blot实验检测敲低MTA2同时过表达e IF4E对食管癌细胞迁移和侵袭能力的影响以及EMT相关蛋白表达水平的变化。10应用免疫组织化学法检测裸鼠移植瘤中Ki-67和CD31的表达情况。11应用western blot检测裸鼠移植瘤中EMT相关蛋白的表达情况。结果:1实时荧光定量PCR结果显示,与正常食管上皮组织和癌旁组织相比,食管癌组织中MTA2的表达上调(P0.05),且食管癌组织中MTA2与Sp1的表达水平呈正相关关系(r=0.407,P0.05),而食管癌组织中MTA2与mi R146A、mi R149、mi R34A的表达水平均无相关性(P0.05)。食管癌组织中MTA2的表达水平与患者的年龄、性别、分化程度和肿瘤大小无关(P0.05),而与肿瘤的TNM分期和淋巴结浸润有关(P0.05)。2 Western blot与免疫组织化学结果均显示,与正常食管上皮组织相比,食管癌组织中MTA2蛋白的表达水平有升高的趋势。3 MTS法检测结果显示,敲低MTA2能够抑制食管癌KYSE30与KYSE510细胞的增殖活性(P0.05),而过表达MTA2对食管癌KYSE30与KYSE510细胞的增殖活性具有促进作用(P0.05)。4 Transwell实验结果显示,敲低MTA2能够抑制食管癌KYSE30与KYSE510细胞的迁移和侵袭能力(P0.05),过表达MTA2能够促进食管癌KYSE30与KYSE510细胞的迁移和侵袭能力(P0.05)。5实时荧光定量PCR实验和western blot实验结果显示,敲低MTA2能够促进E-cadherin基因和蛋白的表达(P0.05),降低N-cadherin、Vimentin、CD24、MYLK基因和蛋白的表达(P0.05);过表达MTA2能够降低E-cadherin基因和蛋白的表达(P0.05),促进N-cadherin、Vimentin、CD24、MYLK基因和蛋白的表达(P0.05)。6细胞免疫荧光实验结果显示,敲低MTA2能够促进E-cadherin的表达,降低N-cadherin和Vimentin的表达。7免疫共沉淀实验结果显示,MTA2在食管癌细胞中能够与Twist蛋白相结合。8实时荧光定量PCR实验结果显示,与正常食管上皮组织相比,食管癌组织中e IF4E的表达水平明显增高(P0.05),且食管癌组织中e IF4E与MTA2的表达水平呈正相关关系(r=0.418,P=0.001)。Western blot实验结果显示,与正常食管上皮组织相比,食管癌组织中e IF4E的蛋白表达水平也呈现上升趋势。9敲低MTA2能够明显降低e IF4E和p-e IF4E的表达(P0.05)。与单独转染si-MTA2组相比,过表达e IF4E能够逆转敲低MTA2对食管癌细胞迁移和侵袭能力的影响(P0.05),并降低食管癌细胞中E-cadherin的表达水平(P0.05),使N-cadherin、Vimentin的表达水平升高(P0.05)。10免疫组织化学法检测到MTA2过表达组的裸鼠移植瘤中Ki-67和CD31的表达水平均高于空载体组。11 Western blot实验结果显示,MTA2过表达组裸鼠移植瘤与空载体组移植瘤相比,N-cadherin、Vimentin的表达有升高的趋势,而E-cadherin的表达水平有降低的趋势。结论:食管癌中MTA2的表达水平上调,可能与转录因子Sp1的表达水平升高有关。MTA2在体内和体外均能够促进食管癌细胞的增殖活性;在体外还能够促进食管癌细胞的迁移和侵袭能力,促进食管癌细胞发生EMT,这一过程可能与促进p-e IF4E的表达有关。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.1

【参考文献】

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本文编号：1185649