CIK细胞联合粉防己碱对结肠癌SW620细胞株增殖抑制作用研究

发布时间：2017-11-15 03:23

  本文关键词：CIK细胞联合粉防己碱对结肠癌SW620细胞株增殖抑制作用研究

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【摘要】：目的:临床流行病学研究发现,结肠癌(Colon cancer)已经最常见的消化道恶性肿瘤之一,男性患病比女性略多。目前国内外结肠癌治疗指南是以手术、化疗和放疗等多种方法结合的综合治疗,国内多数学者在此基础上联合细胞免疫治疗和中草药治疗,取得了一定的临床经验和效果。结肠癌的发病与多种因素有关,精细饮食和缺乏运动并精神压力增高的生活方式以及人口老龄化,加速了我国结肠癌(colon cancer)的发病率和死亡率逐年上升趋势,但由于结肠癌起病隐匿,进展缓慢,症状和良性疾病没有特异性区别,早期难以确诊,大多数患者确诊时已属中晚期。近几十年来,生物培养技术不断发展及相应的生物制剂进入临床使用,细胞免疫疗法已经成为了继手术治疗、放射治疗和化学治疗后的第四种肿瘤治疗手段,对于机体残存的转移肿瘤病灶的治疗效果尤其显著,是防治肿瘤转移和复发的有效手段。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)是一种新型免疫活性细胞,具有体外增殖方便快速、非限制性抑制肿瘤活性高、无毒副作用、安全性高等优点。CIK不仅能够直接杀伤肿瘤细胞,还可以通过分泌炎性细胞因子间接抑制肿瘤细胞增殖,多种机制调节和增强机体免疫功能,是新一代抗肿瘤过继细胞免疫治疗的重要手段。粉防己碱(Tetrandrine,Tet)新的药理作用不断被发现,既往研究已经证明其对心血管和炎症方面的药理作用。随着研究的深入,认为粉防己碱可以抑制肿瘤细胞增殖,甚至可逆转多药耐药,可作为新的抗肿瘤中药应用于临床,在消化道肿瘤治疗方面,尤其对结肠癌具有很好的抑制作用。为了阐明CIK细胞联合粉防己碱对结肠癌SW620细胞株杀伤作用,本研究通过流式细胞仪检测献血者外周血中CIK细胞增值变化;通过MTT法检测CIK细胞单独或者联合不同浓度粉防已碱对结肠癌SW620细胞株的增殖抑制功能,为探寻临床治疗结肠癌的新思路、新方法提供实验依据。方法:研究对象采集12名健康人外周静脉血,分离出单个核细胞(Peripheril blood mononuclear cell,PBMC),使用密度梯度离心法提取外周血单个核细胞后进行体外培养阶段,分别加入相应的细胞因子和单克隆抗体定向诱导和扩增CIK细胞,经流式细胞仪分析CIK细胞数量和表型变化,体外培养至第14天,在不同浓度的Tet液体里混合培养CIK细胞和SW620细胞,采用MTT法观察单用Tet组,CIK细胞组和Tet联合CIK细胞组对SW620细胞的增殖抑制效应,通过流式细胞术检测各组对结肠癌SW620细胞的凋亡诱导作用。结果:在提取12名健康供血者外周血单个核细胞后,通过体外诱导分化和扩增,细胞总数不断增多,经流式细胞仪分析,具有CIK细胞表型的细胞比例与培养时间成正相关。在体外CIK细胞对结肠癌SW620细胞有增殖抑制活性,且抑制活性随细胞浓度提高而不断增强;流式结果显示,CIK细胞中表达CD3+CD56+细胞出现大量增殖,由实验开始前的0.13%可以上升到第14天的27.8%(P0.05);MTT结果显示,随着效靶比的增加,CIK细胞的杀伤活性逐渐增强,而CIK细胞在不同浓度梯度的Tet与SW620细胞共培养48h后,抑制活性随浓度增长而增强。而在CIK与Tet联合作用下,对于SW620细胞的增殖抑制作用较单用时明显增高(P0.05),其中以Tet30μmol/L联合CIK效靶比40:1时功效最大(P0.05)。CIK细胞联合Tet组对SW620细胞株的增殖抑制效应和凋亡诱导活性较单用CIK细胞和单用Tet组有明显提高(P0.05)。结论:CIK细胞对结肠癌SW620细胞有抑制增殖作用,粉防己碱对结肠癌SW620细胞增殖亦有抑制作用,粉防己碱能提高CIK细胞在体外抗结肠癌SW620细胞活性。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.35

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本文编号：1188178