亚硝酸盐对人肝癌SMMC-7721细胞线粒体生成及迁移侵袭能力的影响

发布时间：2017-11-17 04:21

  本文关键词：亚硝酸盐对人肝癌SMMC-7721细胞线粒体生成及迁移侵袭能力的影响

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【摘要】：背景亚硝酸盐是癌启动剂的观念已经根深蒂固,然而目前尚缺乏亚硝酸盐致癌的直接实验性依据。近年来陆续发现低剂量的亚硝酸盐具有降血压、降血脂、预防动脉粥样硬化和减轻器官缺血再灌注损伤的药理作用。在将亚硝酸盐开发为临床药物之前,必须了解亚硝酸盐对合并癌症患者的影响。癌的发生发展不仅需要癌的启动,而且依赖癌的促进。癌的促进包括癌细胞的增殖、侵袭和转移。癌细胞的这些行为都需要能量,线粒体是能量产生的主要场所。线粒体是一个动态变化的细胞器,通过线粒体生成和线粒体自噬调控线粒体质量。线粒体质量的变化与癌的促进关系密切。了解亚硝酸盐对癌细胞线粒体生成的作用,对进一步研究亚硝酸盐的促癌作用有重要意义。目的研究亚硝酸盐对人肝癌SMMC-7721细胞线粒体生成的影响,为亚硝酸盐促癌这一观点提供理论依据。方法用系列浓度的亚硝酸钠在常氧下孵育人肝癌SMMC-7721细胞24 h,用MTT法测定吸光度值反映细胞活力;用ROS示踪剂观察细胞内ROS水平的变化;Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力;用微丝示踪剂染色应力纤维和伪足、Mito-Tracker Red染色线粒体,在荧光显微镜下观察其形态、数量及分布情况;RT-PCR检测线粒体标志分子COXⅠ和COXⅣ基因的表达;在激光共聚焦显微镜下观察被Mito-Tracker Green染色的线粒体的质量变化;HIF-1ɑ、线粒体生成标志分子PGC-1α和细胞色素C蛋白的表达水平用Western blot方法检测。结果MTT法结果发现16 mg·L-1亚硝酸钠作用24 h对细胞活力的促进作用最强;ROS示踪剂DCFH-DA孵育细胞,在荧光显微镜下发现,亚硝酸钠明显增强细胞内ROS水平;Transwell小室实验显示,亚硝酸钠孵育细胞24 h,可以明显增强细胞迁移和侵袭能力;微丝示踪剂和Mito-Tracker Red共染色,荧光显微镜下发现,亚硝酸钠促进应力纤维和伪足增加,线粒体呈现核周分布,以上现象均可以被活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)抑制;RT-PCR结果显示,亚硝酸钠明显降低线粒体标志分子COXⅠ和COXⅣ基因的表达;Mito-Tracker Green染色,激光共聚焦显微镜下发现,亚硝酸钠明显减少线粒体质量;Western blot结果显示,HIF-1ɑ蛋白表达水平升高,线粒体生成标志分子PGC-1α和细胞色素C蛋白表达水平降低,这些现象同样被NAC所逆转。结论低剂量亚硝酸钠通过ROS/HIF-1ɑ途径减少人肝癌SMMC-7721细胞线粒体生成,促进细胞迁移和侵袭。
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7

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本文编号：1194799