麦冬皂苷B通过miR-34b-5p对非小细胞肺癌A549细胞影响的研究

发布时间：2017-11-19 10:26

  本文关键词：麦冬皂苷B通过miR-34b-5p对非小细胞肺癌A549细胞影响的研究

  更多相关文章： 麦冬皂苷B 非小细胞肺癌 miR-34b-5p Met 迁移 侵袭

【摘要】：研究的目的和意义：肺癌严重危害人类健康是目前世界上最常见的恶性肿瘤,在恶性肿瘤所致的死亡中居首位,造成极大的疾病负担。其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)是肺癌的主要病理类型,占所有肺癌病例的80%以上。随着综合治疗模式以及分子生物化学的发展,NSCLC的疗效有所提高,但预后仍不理想,5年总生存率不到20%。微小核糖核酸(miRNA)是一类广泛存在的非编码蛋白的小分子RNA, miRNA表达及调控失衡在恶性肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。近年来,随着对microRNA研究的深入,越来越多的研究显示miRNA在肺癌的发展过程中占有重要的地位。其中miR-34b-5p被证实与NSCLC的发生和发展密切相关。目前中医药在临床上治疗肿瘤已取得显著疗效,相比于西医治疗肿瘤,中医在抑制肿瘤转移和迁移,防止肿瘤复发,稳定瘤体,改善患者全身症状,提高患者生活质量等方面具有明显优势。“周氏克金岩方”是国医大师周仲瑛教授通过长期临床实践总结由养阴益气、活血祛瘀、燥湿化痰、软坚散结等四类功效药物组成的治疗肺癌的有效方剂。经高通量筛选,得到对非小细胞肺癌(NSCLC)有细胞毒作用的单体靶点有20余种,包括麦冬皂苷、异甘草素、槲皮素、人参皂苷和联苄类化合物等单体化合物。在这张抗肺癌方剂中,麦冬皂苷B (Ophiopogonin B, OP-B)作为一味不可或缺的中药组分,具有显著的体外抗癌作用,但其相关机理有待进一步研究。本实验通过检测感染过表达慢病毒LV-hsa-miR-34b的A549细胞以及加入了OP-B的A549细胞中miR-34b-5p及Met的表达,来揭示OP-B抗NSCLC的可能机制。方法：通过阅读相关文献,挑选出数个对非小细胞肺癌A549细胞有影响的miRNA,通过Real-time PCR技术从中筛选出加入麦冬皂苷B后差异表达的miRNA,以此miRNA为靶点,通过Real-time PCR技术比较其在正常胚胎肺成纤维细胞MRC-5细胞以及A549细胞中的表达量,鉴定其在非小细胞肺癌A549的表达特性,判断其发挥的作用。构建hsa-miR-34b过表达慢病毒载体,用重组质粒pHLV-miR-34b感染A549细胞并鉴定转染效率。通过常用的TargetScans、PicTar和PITA等靶基因预测软件预测miR-34b的潜在靶基因。通过Real-time PCR以及Western Blot技术从基因水平以及蛋白水平验证miR-34b-5p和OP-B对Met的影响,通过划痕实验和transwell实验验证miR-34b-5p对A549细胞迁移和侵袭的影响,以期揭示OP-B可能的抗癌机制。结果：1. Real-time PCR结果显示加入药物前后miR-21-5p、miR-148a-3p、miR-29a-3p、 miR-338-5p、miR-125a-5p的表达变化不明显,而miR-34b-5p的表达变化显著,明显升高,说明麦冬皂苷B能影响A549细胞中miR-34b-5p的表达。2. Real-time PCR显示正常胚胎肺成纤维细胞MRC-5细胞中miR-34b-5p的表达量明显高于非小细胞肺癌A549细胞,说明miR-34b-5p在非小细胞肺癌中发挥抑癌的作用。3. hsa-miR-34b过表达慢病毒载体的构建及效率鉴定的实验,通过基因测序显示miR-34b的基因正确地插入到了载体pHLV中,Real-time PCR显示转染后的细胞miR-34b-5p的表达量明显升高,荧光镜下可见发光蛋白,说明重组慢病毒质粒成功感染A549细胞。4.通过查阅相关文献并利用生物学靶基因预测软件分析,发现miR-34b预测的靶基因中包括met,且提示met可能是miR-34b-5p的关键下游靶基因。5. Real-time PCR以及Western Blot结果示Micro-up组和OP-B组细胞Met的表达低,而A549组和NC组Met的表达高。6.划痕实验和transwell实验结果显示Micro-up组细胞迁移和侵袭慢,而NC组细胞迁移和侵袭快。结论：1.麦冬皂苷B能显著降低非小细胞肺癌A549细胞中miR-34b-5p的表达水平。2. miR-34b-5p在非小细胞肺癌A549细胞中表达下调,发挥抗癌作用。3.met是miR-34b-5p的靶标基因。4.外源性上调miR-34b-5p的表达,可在基因和蛋白水平下调Met的表达；加入麦冬皂苷B,也可在基因和蛋白水平下调Met的表达。麦冬皂苷B可能通过上调A549细胞miR-34b-5p表达,进而抑制下游靶基因met的表达而发挥抗癌作用。5.外源性上调miR-34b-5p的表达,可抑制A549细胞的迁移和侵袭。
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 许运龙,郭昭扬,张云兴,许贤荣;血管内皮生长因子在人非小细胞肺癌中表达的临床研究[J];中华肿瘤杂志;2000年05期

2 王继营,高珊,崔黎,黄丽春,宋立友;“双异”联合治疗晚期非小细胞肺癌37例[J];中国肺癌杂志;2000年02期

3 田静,李蓓兰;老年晚期非小细胞肺癌的化疗:一种新趋势[J];中国肺癌杂志;2000年05期

4 张世雯,周清华;不同的分割方案与化疗联合治疗非小细胞肺癌[J];中国肺癌杂志;2000年05期

5 胡发明,华波;血清白介素-10水平是晚期非小细胞肺癌病人的一项预后因素[J];国外医学(内科学分册);2000年11期

6 于亮,王梅,张灿灼;微血管在非小细胞肺癌中的表达及临床意义[J];泰山医学院学报;2000年04期

7 朱建英;预计2009年非小细胞肺癌药物市场将达20亿美元[J];国外医药(合成药 生化药 制剂分册);2001年02期

8 张利伟,刘树秋,陈海英,万锦华;立体定向适形放疗配合常规放疗治疗非小细胞肺癌近期疗效分析[J];黑龙江医药科学;2001年05期

9 王肇炎;晚期非小细胞肺癌的解救化疗[J];肿瘤研究与临床;2001年01期

10 朱尧武,杨宇飞;非小细胞肺癌的术后辅助治疗[J];中国临床医生;2001年12期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 张新民;唐蜜;李代强;;磷酸化酪氨酸蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其意义[A];中华医学会病理学分会2006年学术年会论文汇编[C];2006年

2 胡旭东;杨国仁;霍宗伟;方永存;陈鸣陆;;~(99m)Tc-MIBI SPECT显像观察非小细胞肺癌多药耐药的研究[A];首届全国肿瘤核医学新技术研讨会论文集[C];2007年

3 秦庆亮;熊海健;王爱;边海蓉;卢振国;杨培英;朱斌耀;王芸;;立体定向放射治疗放疗后复发非小细胞肺癌[A];2007第六届全国放射肿瘤学学术年会论文集[C];2007年

4 冯耘;万欢英;高蓓莉;项轶;刘嘉琳;;血管紧张素转换酶二在非小细胞肺癌肿瘤生长和血管生成中的作用[A];中华医学会第五届全国胸部肿瘤及内窥镜学术会议论文汇编[C];2011年

5 ;非小细胞肺癌术后辅助治疗及一线治疗[A];天津市抗癌协会肺癌专业委员会2011年学术年会论文集[C];2011年

6 蒋峰;许林;史美祺;;1560例非小细胞肺癌患者多因素预后分析[A];第13届全国肺癌学术大会论文汇编[C];2013年

7 张华;;术前中性粒细胞和淋巴细胞比值对非小细胞肺癌患者预后的影响[A];第13届全国肺癌学术大会论文汇编[C];2013年

8 王子平;;老年晚期非小细胞肺癌治疗思考[A];第三届中国肿瘤内科大会教育集暨论文集[C];2009年

9 张沂平;;非小细胞肺癌个体化化疗[A];2009年浙江省肿瘤学术年会暨肿瘤诊治新进展学习班论文汇编[C];2009年

10 刘嘉湘;施志明;李和根;徐振晔;朱晏伟;赵丽红;高虹;刘苓霜;朱惠蓉;张晖;;益肺抗瘤饮治疗271例非小细胞肺癌临床观察[A];中医药优秀论文选（下）[C];2009年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 记者 李颖;特罗凯对中国非小细胞肺癌患者效果佳[N];科技日报;2007年

2 晓白;非小细胞肺癌研究获重大进展[N];人民日报;2008年

3 记者 张文天;非小细胞肺癌中医药综合医疗方案研究进展顺利[N];科技日报;2009年

4 辛勇　张先稳;早期非小细胞肺癌的治疗进展[N];中国中医药报;2004年

5 记者高新军;专家提出 建非小细胞肺癌中医临床指南[N];中国中医药报;2009年

6 上海长海医院呼吸科 夏阳 整理 邱志涛;非小细胞肺癌放虎归山还是乘胜追击[N];健康报;2013年

7 记者 王丹;新研究揭示炎症促非小细胞肺癌发生机制[N];健康报;2014年

8 记者 李颖;凯美纳成晚期非小细胞肺癌治疗优选方案[N];科技日报;2014年

9 白京丽;非小细胞肺癌最佳治疗方案[N];中国医药报;2000年

10 ;表皮生长因子受体抑制剂在治疗非小细胞肺癌中的作用[N];医药经济报;2005年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 白艳（Bai Sally）;整合素αvβ5合并EGFR检测用于非小细胞肺癌转移及预后评估的研究[D];复旦大学;2013年

2 王筱恬;PLZF和DACH1的异常表达影响非小细胞肺癌发生与发展的分子机制[D];复旦大学;2012年

3 洪专;木犀草素治疗EGF受体继发性突变的非小细胞肺癌的实验研究[D];南京大学;2014年

4 张沛;ILT4在非小细胞肺癌中的作用及分子机制研究[D];山东大学;2015年

5 王世坤;RBP2诱导非小细胞肺癌和食管鳞癌表皮间质化[D];山东大学;2015年

6 赵世俊;~(18)F-FDG PET/CT在非小细胞肺癌预后评估中的应用研究[D];北京协和医学院;2013年

7 邱晨;影响非小细胞肺癌手术后远期生存的相关因素分析[D];山东大学;2015年

8 姜远瞩;术前血液学指标与淋巴结转移阴性非小细胞肺癌患者预后关系的研究[D];山东大学;2015年

9 朱良明;STAT3及其靶基因对非小细胞肺癌生物学行为调控机制的初步实验研究[D];山东大学;2015年

10 周菊;HPV-16感染对非小细胞肺癌和A549细胞的影响及miRNAs表达改变的研究[D];昆明医科大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王勇;诱导型一氧化氮合酶在非小细胞肺癌中表达的临床意义[D];中国医科大学;2006年

2 王静;Eg5、Ki-67在非小细胞肺癌中的表达及临床意义[D];河北医科大学;2015年

3 覃建颖;IL-21和Tc1细胞在非小细胞肺癌患者外周血及癌灶中的变化及相互作用[D];广西医科大学;2015年

4 张瑞;ⅢA-N2期非小细胞肺癌手术治疗和放射治疗的疗效对比及相关预后因素的分析[D];河北医科大学;2015年

5 石姣姣;基于多肽构建抗肿瘤靶向药物的应用研究[D];北京协和医学院;2015年

6 胡世霖;非小细胞肺癌中医辨证分型与Napsin A、TTF-1在肺癌组织中表达的相关性研究[D];福建中医药大学;2015年

7 王婷婷;细胞因子活化杀伤细胞治疗非小细胞肺癌临床研究[D];河北医科大学;2015年

8 李晓霞;非小细胞肺癌ERCC1、RRM1和TUBB3表达及临床意义[D];河北医科大学;2015年

9 史晓熠;PTP4A1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义[D];河北医科大学;2015年

10 张旭;LncRNA h19在非小细胞肺癌中的表达及对细胞的生物学行为的影响[D];河北医科大学;2015年

，

本文编号：1203258