雄激素受体与相关分子在乳腺癌中作用的研究

发布时间：2017-11-20 15:16

  本文关键词：雄激素受体与相关分子在乳腺癌中作用的研究

  更多相关文章： 雄激素受体 let-7a 人类表皮生长因子2 转移相关蛋白1 共表达

【摘要】：目的在不同雌激素受体(estrogen receptor,ER)状态乳腺癌中分别探讨雄激素受体(androgen receptor,AR)、转移相关蛋白1(metastasis-associated protein-1,MTA1)与人类表皮生长因子受体2(HER2)三者之间的表达关系,其表达与临床病理特征的联系和对预后产生的影响。在ER阴性乳腺癌细胞系中探究AR活性的变化对其下游分子表达的作用,及对ER阴性的MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖的影响。方法收集天津医科大学肿瘤医院2008年1月至2009年12月经手术切除、病理证实的乳腺浸润性导管癌,分别在ER阳性和阴性病例中各随机抽取120例,共计240例。采用免疫组化方法检测AR、MTA1表达,ER、HER2、相关临床病理特征及随访资料通过查阅存档的临床病历资料获得。本研究采用雌激素受体阴性的乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞体外培养,利用免疫荧光验证AR在该细胞系中的表达状态。通过向MDA-MB-231细胞中感染慢病毒得到AR低表达的细胞。随后MTT和平板克隆实验来验证AR下调组与对照组的细胞增殖能力,并且通过实时定量PCR(real time PCR,RT-PCR)验证mi R-let-7a的表达是否随AR的下调出现相应的变化。应用Western blot的方法检测AR下调之后相应的下游蛋白表达的变化。向AR下调的细胞中感染let-7a上调的慢病毒,进而用MTT和平板克隆实验来验证let-7a上调组与对照组的细胞增殖能力,并且通过实时定量PCR验证mi R-let-7a的表达是否出现相应的变化。应用Western blot的方法检测let-7a上调之后相应的下游蛋白表达的变化,从而验证let-7a在AR对乳腺癌细胞生长增殖能力影响中的作用。本研究初步探讨AR与let7a之间的作用关系及其对下游分子表达和细胞增殖能力的影响。结果在240例患者中,AR阳性者占59.2%,MTA1过表达者占36.7%。MTA1的表达在ER阴性组中与AR/HER2共表达显著相关。在中位随访时间为74个月的时间里,单因素生存分析显示,ER阳性组中AR阳性者具有较好的预后(P0.05),MTA1的表达则与患者的预后无关;ER阴性组中AR与HER2共表达的病例预后要差于其他病例(P0.05),MTA1过表达也预示着不良的预后(P0.05)。Cox多因素分析结果显示AR表达和淋巴结转移情况是影响ER+组的无瘤生存率的独立因素;而在ER-组中,AR/HER2共表达和淋巴结转移是影响无瘤生存率的独立因素。1.免疫荧光结果显示AR在MDA-MB-231细胞中广泛表达2.以慢病毒为载体感染MDA-MB-231细胞,并筛选扩增得到AR下调细胞和对照组细胞。利用稳定感染的细胞,MTT实验发现AR下调组的细胞增殖能力要明显强于对照组;平板克隆实验的结果也与MTT实验相同,AR下调组的细胞克隆数要多于对照组的细胞数。3.RT-PCR验证AR下调组与对照组间let-7a的表达差异,结果显示AR下调组的细胞中let-7a相对于对照组有0.3倍的下调。Western Blot实验结果显示AR下调组的AR相对于对照组有明显下调,而且let-7a下游分子HMGA2和磷酸化STAT3(phosphorylated STAT3,p STAT3)的表达在AR下调组中有显著的上调。4.以慢病毒为载体感染AR下调细胞,并筛选扩增得到AR下调/let-7a上调的MDA-MB-231细胞。利用该细胞进行MTT实验与平板克隆实验,结果显示AR下调/let-7a上调的细胞系相比于AR下调的对照细胞细胞增殖能力明显被抑制,平板克隆实验也有相同趋势的结果。5.RT-PCR验证AR下调/let-7a上调的细胞与AR下调的对照细胞之间let-7a的表达差异,结果显示let-7a相对于对照组有约9倍的上调。而且实验组中let-7a下游分子HMGA2和p STAT3的表达相对于对照组有显著下调。结论ER阳性组中AR是影响患者预后的独立因素,而在ER阴性组中MTA1的表达与AR/HER2共表达显著相关。我们的结果表明AR在ER阳性的乳腺癌中可能成为内分泌治疗的新靶标,在ER阴性乳腺癌中AR/HER2的相互作用有可能通过MTA1分子调节肿瘤细胞的恶性行为。雄激素是通过与其相应的受体来发挥生物学作用的。研究显示AR信号的抑制使得细胞增殖能力增强,同时细胞内HMGA2和p STAT3蛋白上调。AR下调之后let-7a的表达同时出现下调,同时可以使let-7a下游的蛋白表达产生相应变化。且当let-7a上调之后原本AR下调的细胞增殖能力下降,同时let-7a下游的蛋白表达出现抑制,提示AR可能通过let-7a作用于其下游分子。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
，

本文编号：1207577