BrMC对肝癌相关巨噬细胞诱导SMMC-7721细胞系干样细胞特性的影响

发布时间：2017-11-21 04:28

  本文关键词：BrMC对肝癌相关巨噬细胞诱导SMMC-7721细胞系干样细胞特性的影响

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【摘要】：目的:研究8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxychrysin,Br MC)对肝癌相关巨噬细胞极化表型以及肝癌相关巨噬细胞诱导人肝细胞癌SMMC-7721细胞系细胞自我更新、干细胞标志物表达、迁移和侵袭等特性的影响,并探讨Br MC调节肝癌相关巨噬细胞NF-κB表达与其逆转肝癌相关巨噬细胞极化表型和抑制肝癌相关巨噬细胞诱导SMMC-7721细胞系肝癌干样细胞特性之间的关联性。方法:SMMC-7721细胞系第3代球形成细胞鉴定作为肝癌干样细胞(liver cancer stem-like cells,LCSLCs)模型,并收集LCSLCs条件培养基(LCSLC-CM)。以佛波酯(Phorbol Myristate Acetate,PMA)活化的体外培养人THP-1单核细胞系细胞为THP-1源性巨噬细胞,用LCSLC-CM处理的THP-1源性巨噬细胞作为肝癌相关巨噬细胞或者在Ttranswell小室与LCSLCs共培养系统中活化THP-1源性巨噬细胞为肝癌相关巨噬细胞。LPS与INF-γ处理THP-1源性巨噬细胞作为经典活化M1型巨噬细胞对照。不同浓度Br MC(0、5、10、20μmol/L)处理LCSLCs或LCSLCs/THP-1源性巨噬细胞共培养系统观察药物干预效应。NF-κB特异性抑制剂SN50用于探讨Br MC药理作用机制。比较肿瘤球形成率测定细胞自我更新能力,Western blot分析干细胞标志物CD133和CD44蛋白的表达,划痕法和Transwell小室侵袭试验检测细胞迁移和侵袭能力。细胞免疫荧光染色和Western-blot分析巨噬细胞表面标志蛋白CD68和M2型巨噬细胞即肝癌相关巨噬细胞表面标志蛋白CD163表达。ELISA测定肝癌相关巨噬细胞条件培养基细胞因子IL-10、IL-12、VEGF、MMP-9浓度;Griess法测定培养基NO水平。结果:1.与亲本细胞相比,第3代人肝细胞癌SMMC-7721细胞系球形成细胞高表达CD133和CD44干细胞标志蛋白,更高肿瘤球形成率,具有肝癌干样细胞特性。2.LCSLC-CM或与肝癌干样细胞共培养能有效诱导体外培养THP-1源巨噬细胞转分化为肝癌相关巨噬细胞。与M1型巨噬细胞相比,肝癌相关巨噬细胞高表达CD163蛋白;细胞分泌谱为IL-10high、IL-12low、VEGF high、MMP-9 high;且NO释放减少,呈现出M2型巨噬细胞极化表型。3.肝癌相关巨噬细胞条件培养基或肝癌干样细胞/THP-1源巨噬细胞共培养条件培养基有效诱导SMMC-7721细胞自我更新、干细胞标志蛋白表达、体外细胞迁移和侵袭。4.Br MC以浓度依赖方式降低肝癌相关巨噬细胞CD163表达,逆转肝癌相关巨噬细胞M2型巨噬细胞极化相关细胞因子分泌谱。5.Br MC以浓度依赖方式抑制肝癌相关巨噬细胞条件培养基诱导SMMC-7721细胞CD133和CD44蛋白表达,肿瘤球形成和体外细胞迁移和侵袭作用(P0.05)。6.特异性NF-κB抑制剂SN50以浓度依赖方式降低肝癌相关巨噬细胞NF-κB(p65)蛋白表达水平(P0.05);同时,SN50与Br MC协同拮抗肝癌相关巨噬细胞条件培养基或肝癌干样细胞/THP-1源巨噬细胞共培养条件培养基诱导SMMC-7721细胞自我更新、干细胞标志蛋白表达、体外细胞迁移和侵袭作用。结论:1.肝癌干样细胞条件培养基或肝癌干样细胞/THP-1源性巨噬细胞共培养促成THP-1源性巨噬细胞M2型极化。2.肝癌相关巨噬细胞条件培养基或肝癌干样细胞/THP-1源性巨噬细胞共培养条件培养基诱导SMMC-7721细胞系细胞自我更新、干细胞标志物表达、迁移与侵袭等肝癌干样细胞特性。3.Br MC具有逆转肝癌相关巨噬细胞M2极化表型作用。4.Br MC具有抑制肝癌相关巨噬细胞诱导SMMC-7721细胞肝癌干样细胞特性作用。5.Br MC逆转肝癌相关巨噬细胞M2极化表型和抑制肝癌相关巨噬细胞诱导SMMC-7721细胞系干样细胞特性作用机制涉及其下调肝癌相关巨噬细胞NF-κB(p65)蛋白表达。
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7

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本文编号：1209711