Rad51基因沉默对人肺腺癌A549细胞体内外增殖能力的影响

发布时间：2017-11-23 17:34

  本文关键词：Rad51基因沉默对人肺腺癌A549细胞体内外增殖能力的影响

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【摘要】：目的:本课题通过慢病毒包装si RNA干扰抑制人肺腺癌A549细胞Rad51基因的表达,研究感染前后A549细胞增殖、细胞周期以及裸鼠移植瘤早期生长的变化,探讨Rad51基因在肺癌发生发展中的作用,以期为NSCLC的靶向治疗提供实验数据及理论依据。方法:常规培养人肺腺癌A549细胞株,针对Rad51基因序列,选取并设计RNA干扰靶点,构建针对Rad51基因的干扰慢病毒。实验分为三组:Normal组:用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养人肺腺癌A549细胞;Lenti-NC组:感染了空载体慢病毒以后的肺腺癌A549细胞;Lenti-Rad51si组:感染了Rad51si RNA慢病毒的肺腺癌A549细胞。通过荧光定量PCR(Q-PCR)测定感染前后A549细胞中的Rad51 m RNA水平;Western Blot检测感染前后A549细胞中Rad51蛋白的表达;克隆形成实验研究感染前后A549细胞的增殖能力;MTT法检测感染前后A549细胞的增殖活性;FCM法分析感染前后A549细胞的细胞周期情况;裸鼠移植瘤实验观察感染前后A549细胞在裸鼠体内的生长状况。结果:1.由上海吉凯公司构建Rad51 si RNA慢病毒质粒,包装后的病毒Lenti-Rad51滴度为2×108TU/ml,空载体病毒Lenti-NC滴度为8×108 TU/ml。2.Rad51 si RNA慢病毒和阴性对照慢病毒感染A549细胞后均能获得较高的感染效率;3.Rad51 si RNA慢病毒感染A549细胞48小时后,应用Quantitative RT-PCR和Western Blot技术检测,结果显示该组细胞株中Rad51 m RNA和蛋白表达水平均下调;4.Rad51基因沉默降低A549细胞的克隆形成能力;5.MTT实验结果表明下调的Rad51降低了A549细胞的活性;6.FCM法结果证实Rad51表达量下调能将A549细胞阻滞在G1期;7.动物实验表明,Rad51基因沉默后裸鼠成瘤能力下降。结论:体外实验表明Rad51 si RNA通过抑制Rad51基因的表达,可诱导A549细胞克隆形成数量减少,细胞的活性下调,将A549细胞阻滞在G1期;体内实验表明Rad51基因沉默后裸鼠成瘤的能力下降。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2

【参考文献】

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本文编号：1219297