SIRT1在宫颈癌发生中作用的初步研究

发布时间：2017-11-24 22:24

  本文关键词：SIRT1在宫颈癌发生中作用的初步研究

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【摘要】：目的:第Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶亦称为Sirtuins,即沉默信息调节因子2(silent information regulator 2,Sir2)的同源蛋白,研究表明SIRT1与肿瘤的发生发展密切相关,有望成为肿瘤治疗的新靶点。本研究拟通过在组织水平检测宫颈癌SIRT1的表达及其与临床病理特征之间的关系;在细胞水平研究SIRT1对宫颈癌Si Ha细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及其Notch信号通路相关蛋白的影响,探讨SIRTl在宫颈癌发生、发展中的作用机制及其与Notch-Hes信号通路的关系。方法:收集2012年9月-2014年3月青岛大学附属医院病理科宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织石蜡标本,选取临床病理资料完整者221例(包括CIN I级,CIN II-CIN III级,宫颈鳞癌及正常宫颈组织)。免疫组织化学方法检测SIRT1蛋白的表达,分析其表达与临床指标的相关性;化学合成靶向SIRT1基因的小干扰RNA(si RNA),以Lipofectamine RNAi MAX脂质体为载体转染Si Ha细胞,转染72h后,提取各组总RNA及总蛋白。RT-PCR检测Si Ha细胞SIRT1 m RNA的表达,免疫印迹法检测Si Ha细胞中SIRT1、Notch1、Hes1及cyclin D1蛋白的表达,细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖抑制率,迁移侵袭实验检测Si Ha细胞的迁移侵袭能力,分别应用Annexin V-PE双染法及Hoechst33258染色法检测细胞凋亡。结果:免疫组化结果显示:SIRT1在正常宫颈组织及程度较轻的宫颈上皮内瘤变(CINI级)中未见阳性表达;67例CINII-III组织中有16例SIRT1阳性(23.9%);而54例宫颈癌组织中29例SIRT1表达阳性(53.7%)。RT-PCR结果表明:与空白细胞对照组、转染试剂对照组、SIRT1阴性对照组相比,si RNA-SIRT1干扰组细胞SIRT1 m RNA表达明显下调(P0.05)。Western blot显示:与对照组相比,si RNA-SIRT1干扰组细胞SIRT1蛋白表达量明显下调(P0.05),cyclin D1、Notch1和Hes1蛋白的表达明显上调(P0.05)。CCK-8细胞增殖实验结果表明:si RNA-SIRTl转染组抑制率为37%,SIRT1阴性对照组抑制率为8.7%,转染试剂对照组抑制率7.3%,转染组抑制率明显高于其他组。Transwell迁移及侵袭实验结果显示:与对照组相比,si RNA-SIRT1干扰组穿过人工基底膜细胞数明显减少。流式细胞术结果表明:si RNA-SIRT1干扰组凋亡率为16%而SIRT1阴性对照组凋亡率仅为2.6%。Hoechst33258染色显示:si RNA-SIRT1干扰组Si Ha细胞核明显变小,其染色质浓缩,并可见凋亡小体,而SIRT1阴性对照组、转染试剂对照组和空白细胞对照组细胞核呈均匀淡蓝色。结论:靶向SIRT1基因的si RNA能有效抑制Si Ha细胞的增殖、迁移及侵袭并诱导细胞凋亡,si RNA-SIRT1诱导的细胞凋亡与Notch-Hes信号通路密切相关,有可能通过Notch-Hes信号通路参与高程度CIN向宫颈浸润性癌的转化过程。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33

【参考文献】

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1 王林;Notch信号途径在宫颈癌肿瘤发生中的作用及其机制的初步研究[D];第四军医大学;2006年

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本文编号：1223843