癌基因RMP在食管鳞癌中的表达及与肿瘤侵袭转移及EMT相关性研究

发布时间：2017-11-28 19:00

  本文关键词：癌基因RMP在食管鳞癌中的表达及与肿瘤侵袭转移及EMT相关性研究

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【摘要】：目的:通过检测RMP在人食管鳞癌组织及食管鳞癌细胞系中的表达水平,并建立RMP过表达及干扰细胞株,探究RMP对食管鳞癌细胞侵袭转移及EMT的影响。方法:1.应用qRT-PCR,Western blot实验分别测定RMP在人食管鳞癌组织及相应癌旁组织中mRNA和蛋白表达水平,并分析其与临床病理特征之间的关联。2.应用qRT-PCR,Western blot实验分别测定RMP在食管鳞癌细胞系及正常细胞系中mRNA和蛋白表达水平。3.采用脂质体转染技术建立RMP过表达及干扰瞬时表达食管鳞癌Eca109细胞株,同时应用qRT-PCR,CCK-8实验鉴定转染情况,并检测各瞬时表达细胞株中RMP mRNA的表达水平及细胞增殖水平。4.应用粘附实验测定RMP对Eca109细胞的异质粘附能力影响。5.应用划痕实验检测RMP对Eca109细胞的迁移能力改变。6.应用Transwell侵袭迁移实验测定RMP对Eca109细胞的侵袭迁移能力改变。7.通过Western blot实验检测各细胞株中EMT相关标志物E-cadherin、N-cadherin和Vimentin等表达情况。结果:1.qRT-PCR及Western blot实验结果表明了人食管鳞癌组织中RMP mRNA和蛋白表达水平均明显高于相应癌旁组织,其中RMP的表达和患者的年龄、性别及肿瘤位置无关,而与肿瘤组织的T-stage及淋巴结状况有关。2.qRT-PCR及Western blot实验结果表明:与正常细胞系相比,RMP在食管鳞癌细胞系中mRNA和蛋白均呈高表达水平。3.qRT-PCR实验结果显示了RMP过表达和干扰质粒都可以在Eca109细胞中瞬时表达,且mRNA表达水平呈相应的变化。4.CCK-8试验表明了RMP过表达能促进Eca109细胞的增殖,进一步验证了RMP过表达及干扰瞬时表达食管鳞癌Eca109细胞株构建成功。5.粘附实验表明了RMP过表达能降低Eca109细胞异质粘附能力。6.划痕实验表明了RMP过表达能增强Eca109细胞迁移能力。7.Transwell侵袭迁移实验表明了RMP过表达能增强Eca109细胞侵袭迁移能力。8.Western blot实验结果表明了RMP过表达能抑制Eca109细胞中E-cadherin的表达,同时促进N-cadherin及Vimentin的表达,而RMP干扰后这三种蛋白的表达量基本不受影响。结论:1.RMP在人食管鳞癌组织及食管鳞癌细胞系中均呈高表达水平,并结合其与患者临床病理特征之间的关联,说明RMP可能在食管鳞癌的发生发展过程中起着重要的作用,是一种与食管鳞癌相关的潜在的癌基因。2.RMP过表达能提高Eca109细胞的体外侵袭迁移能力,RMP干扰后这一现象则被抑制;RMP过表达能上调Eca109细胞中N-cadherin及Vimentin的表达量,而E-cadherin的表达量被抑制,表明了RMP过表达能促进Eca109细胞EMT的发生。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.1

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