消癌平注射液联合氟尿嘧啶及丝裂霉素对肺癌A549细胞周期、凋亡及相应基因表达的影响

发布时间：2017-11-29 02:00

  本文关键词：消癌平注射液联合氟尿嘧啶及丝裂霉素对肺癌A549细胞周期、凋亡及相应基因表达的影响

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【摘要】：目的:通过消癌平联合特异性细胞周期药物对肺癌A549细胞生长、细胞周期、凋亡的影响,并检测Cyclin D1、Cyclin E及P53等相关基因表达,初步探讨其可能机制。方法:采用MTT检测消癌平联合氟尿嘧啶及丝裂霉素对肺癌A549的抑制作用。流式细胞术检测各组对药物细胞周期及凋亡的影响。RT-PCR检测各组cyclin D1、Cyclin E及P53基因表达。结果:1 MTT检测各组药物对肺癌A549细胞的生存影响,结果显示,在一定浓度范围内,消癌平组、氟尿嘧啶组及丝裂霉素组对肺癌A549的生长抑制与时间、剂量成正相关,具有时间剂量依赖性,消癌平组、氟尿嘧啶组及丝裂霉素组各组药物的24h、48h、72h的IC50(半数抑瘤率)别为72.40 ul/ml、17.93 ul/ml、7.98ul/ml,57.56ug/ml、15.02ug/ml、2.09 ug/ml,1195.23 ug/ml、182.26 ug/ml、24.99 ug/ml。在不同时间段,消癌平(2ul/ml、8ul/ml、32ul/ml)联合丝裂霉素组(2.00 ug/ml)的OD(光密度)比单药消癌组及丝裂霉素组高,(P0.05),其OD值随浓度的增高而增大(P0.05)。同样,在不同时间段,消癌平(2ul/ml、8ul/ml、32ul/ml)联合氟尿嘧啶组的OD值均比单药消癌组及氟尿嘧啶组高,(P0.05),其OD值随浓度的增高而增大(P0.05)。2通过流式细胞术检测消癌平联合氟尿嘧啶组、丝裂霉素组对肺癌A549细胞周期及凋亡的影响,结果显示消癌平组组和丝裂霉素组与对照组相比,肺癌A549细胞G0/G1期细胞百分比均明显高于对照组,分别为48.43%VS 34.99%、50.69%VS 34.99%,P0.05,有统计学意义。氟尿嘧啶组与对照组相比,肺癌A549细胞S期细胞百分比均明显高于对照组,为50.40%VS 40.86%,P0.05,有显著性差异,消癌平与丝裂霉素两种药物联合用药,其对肺癌A549细胞G0/G1期细胞百分比与消癌平组、丝裂霉素组相比明显增高,62.69%VS 48.43%VS 50.69%,P0.05。消癌平与氟尿嘧啶两种药物联合用药,其对肺癌A549细胞S期细胞百分比与氟尿嘧啶组相比明显增高,60.7%VS 50.40%,P0.05。消癌平组、丝裂霉素组及氟尿嘧啶组与对照组相比,肺癌A549细胞凋亡率明显高于对照组,分别为1.99%、4.68%、4.56%,与对照组0.45%相比具有统计学差异(P0.05)。消癌平与丝裂霉素及氟尿嘧啶两种药物联合用药,肺癌A549细胞凋亡率明显增高,分别由原来4.68%、4.56%提升到9.56%、13.45%,具有显著性差异(P0.05)。3通过RT-PCR检查各组细胞cycline D1、Cycline E、P53等m RNA表达,结果显示消癌平组、氟尿嘧啶组及丝裂霉素组与对照组相比均能提高p53m RNA表达(0.25、0.45、0.53 VS 0.09),且消癌平联合氟尿嘧啶或丝裂霉素的p53m RNA表达均高于氟尿嘧啶组及丝裂霉素组,0.80 VS 0.45、0.83 VS 0.53,相比有显著性差异(P0.05)。对Cyclin D1基因表达,结果显示消癌平组、丝裂霉素组、氟尿嘧啶组与对照组相比均能降低Cyclin D1基因的表达(0.51、0.46、0.59 VS 0.88,P0.05)。消癌平联合丝裂霉素组可显著减低Cyclin D1基因的表达(0.26 VS 0.46,P=0.0150.05),但消癌平联合氟尿嘧啶组对Cyclin D1基因表达的影响与单药氟尿嘧啶组未见明显差异(0.53 VS 0.59,P=0.3140.05)。对Cyclin E基因表达的影响,结果显示消癌平组、丝裂霉素组、消癌平与丝裂霉素联合用药组与对照组相比,均未能降低Cyclin E基因的表达(0.81、0.79、0.88 VS 0.85,P0.05)。氟尿嘧啶组与对照组相比,可降低肺癌A549细胞Cyclin E基因的表达(0.49 VS 0.85 P0.05),但消癌平联合氟尿嘧啶组显示其下调肺癌A549细胞Cyclin E基因表达与单药氟尿嘧啶组未见明显差异0.56 VS 0.49 P=0.1360.05)。结论:1消癌平、氟尿嘧啶、丝裂霉素对肺癌A549细胞的均有抑制作用,在一定范围内呈时间-剂量依赖性,消癌平联合氟尿嘧啶、丝裂霉素可以提高对肺癌A549细胞的抑制效应。2消癌平、氟尿嘧啶、丝裂霉素均可诱导肺癌A549细胞凋亡,消癌平联合氟尿嘧啶、丝裂霉素可以提高对肺癌A549细胞凋亡作用,其机制可能与上调P53 m RNA表达有关。3消癌平、氟尿嘧啶、丝裂霉素分别阻滞肺癌A549细胞的周期于G0/G1、S、G0/G1。消癌平联合丝裂霉素可提高肺癌A549细胞周期G0/G1期阻滞效应,作用机制可能与下调Cyclin D1 m RNA有关。氟尿嘧啶阻滞肺癌A549细胞的周期S期可能与下调Cyclin D1、Cyclin E有关。消癌平联合氟尿嘧啶能够提高其对肺癌A549细胞周期S期阻滞效应,尚不能明确其作用机制与下调Cyclin D1、Cyclin E基因表达有关。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2

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本文编号：1235758