p53在二甲双胍诱导乳腺癌细胞凋亡和衰老中的作用

发布时间：2017-12-01 12:32

  本文关键词：p53在二甲双胍诱导乳腺癌细胞凋亡和衰老中的作用

  更多相关文章： 二甲双胍 乳腺癌细胞 p53 nutlin-3α CP/31398

【摘要】：目的:TP53(Tumor protein p53)作为抑癌基因在乳腺癌细胞中的突变是普遍存在的。而二甲双胍的肿瘤抑制效应在TP53突变的乳腺癌细胞株中的作用尚不明确。本实验主要研究乳腺癌细胞株中p53状态在二甲双胍诱导的乳腺癌细胞生长抑制、衰老和凋亡中的调节作用。材料和方法:使用人乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7/Sip53和MDA-MB-231作为研究对象。这三种乳腺癌细胞株的p53状态分别为:MCF-7,p53野生型;MCF-7/Sip53,p53敲除型;MDA-MB-231,p53突变型。本研究采用MTT法来检测细胞生长、增殖能力及对药物的敏感性。采用Western blot方法检测经过药物处理后不同p53状态的乳腺癌细胞蛋白水平的改变。使用β-半乳糖苷酶细胞染色试剂盒检测药物诱导不同p53状态的乳腺癌细胞衰老的程度。使用细胞凋亡检测ELISA试剂盒来检测药物诱导不同p53状态的乳腺癌细胞凋亡的程度。采用RT-PCR方法来检测不同p53状态的乳腺癌细胞经过药物处理后m RNA表达水平的改变。结果:1.通过浓度梯度的二甲双胍(0.1,0.3,1,3,10,20 m M)分别处理人乳腺癌p53野生型细胞MCF-7、p53敲除型细胞MCF-7/Sip53、p53突变型细胞MDA-MB-231 5天,这三种细胞对二甲双胍敏感性从高到低依次为:p53野生型细胞MCF-7、p53敲除型细胞MCF-7/Sip53、p53突变型细胞MDA-MB-231。2.通过不同浓度的二甲双胍(0,1,3,10 m M)分别处理MCF-7、MCF-7/Sip53 48小时,western blot结果显示:MCF-7细胞中p53及其下游蛋白p21、bax蛋白水平呈剂量依赖性上调趋势,而MCF-7/Sip53细胞中,p53及其下游蛋白水平未随药物处理而发生明显变化。3.p53激活剂nutlin-3α能够增强p53野生型乳腺癌细胞中二甲双胍所诱导的乳腺癌细胞的生长抑制、衰老和凋亡作用,而在p53敲除型的乳腺癌细胞株中未见到该效应。4.另一种p53激活剂CP/31398不仅能够在一定程度上增强p53野生型乳腺癌细胞中二甲双胍诱导的乳腺癌细胞的生长抑制、衰老和凋亡作用,还能够增强p53突变型乳腺癌细胞中二甲双胍诱导的乳腺癌细胞的生长抑制、衰老和凋亡作用。5.在p53突变型细胞MDA-MB-231中重表达野生型p53能够恢复二甲双胍对乳腺癌细胞的生长抑制作用。6.通过不同浓度的二甲双胍处理MCF-7和MCF-7/Sip53 48小时,western blot结果显示,磷酸化AMPK和磷酸化m TOR在p53野生型人乳腺癌细胞MCF-7中随着二甲双胍处理浓度升高表达增强,而在p53敲除型人乳腺癌细胞MCF-7/Sip53中,上述两种蛋白表达水平未见有明显变化。7.二甲双胍类似物苯乙双胍仍需通过野生型p53对乳腺癌细胞起到生长抑制、衰老和凋亡的作用。结论:二甲双胍能够诱导人乳腺癌细胞生长抑制、衰老和凋亡作用的必要条件是细胞中表达野生型p53。p53的激活剂nutlin-3α?和CP/31398可以协同二甲双胍诱导乳腺癌细胞的生长抑制,衰老和凋亡。二甲双胍和p53激活剂nutlin-3α或CP/31398的联合应用可能是对乳腺癌治疗一种更好的干预措施。二甲双胍通过调节AMPK和m TOR信号通路来调节人乳腺癌细胞中p53的水平。
【学位授予单位】：河南科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 鲁明;钦伦秀;;肝癌转移复发机制的分子生物学研究进展[J];肝胆外科杂志;2014年04期

2 徐洁;郭卿;;复方斑蝥胶囊联合内分泌治疗、化疗对晚期乳腺癌的影响[J];黑龙江医药;2014年05期

3 林思园;张利华;李想娣;;PI3K抑制剂对三阴性人乳腺癌细胞株MBA-MB-231/ADR的多药耐药逆转作用[J];临床和实验医学杂志;2015年01期

4 董谦;李丽;王玉凤;冯巧灵;吉彩霞;刘晓骅;罗进勇;;孤儿核受体SHP敲减抑制BMP9诱导C3H10T1/2细胞的成骨分化[J];中国生物化学与分子生物学报;2015年02期

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 毛俊;下调Notch1基因调控乳腺癌干细胞耐药机制的研究[D];大连医科大学;2012年

2 刘艳艳;CD133及ALDH在肿瘤侵袭中的作用及机制研究[D];北京协和医学院;2013年

3 邱阳;WIG-1对人食管鳞癌细胞系顺铂敏感性的影响及其机制研究[D];第三军医大学;2013年

4 顾斌;胚胎干细胞特征性标志物Aire的发现和功能研究[D];浙江大学;2013年

5 刘文扬;MicroRNA-1和microRNA-2抑制肺癌细胞侵袭和粘附的生物学作用研究[D];北京协和医学院;2009年

6 郑晓文;肺癌干细胞的富集、鉴定及调节Hedgehog信号通路对肺癌干细胞功能的影响[D];广西医科大学;2014年

7 李云飞;EN2在人膀胱尿路上皮癌中的表达及其作用机制初步研究[D];南方医科大学;2014年

8 刘军;调节性T细胞对乳腺癌细胞干细胞特征及EMT的影响与调控机制研究[D];天津医科大学;2014年

9 刘艳;PI3K/Akt/mTOR通路抑制剂影响乳腺癌干细胞对内分泌治疗和靶向治疗耐药性的研究[D];天津医科大学;2014年

10 刘亚军;猪诱导干细胞多能性维持机理的研究[D];西北农林科技大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 杨洋;MicroRNA-134靶向Nanog基因调控胶质瘤细胞生物学活性[D];安徽医科大学;2013年

2 王力;环指蛋白180在胃癌组织中的表达及其临床意义[D];天津医科大学;2013年

3 陈冲;三种升麻三萜皂苷类化合物对白血病干细胞Wnt/β-catenin信号通路自我更新机制的初步研究[D];山东中医药大学;2013年

4 张鑫;PDGFR-β在人脑胶质瘤中的表达及临床意义[D];河北医科大学;2014年

5 高萌;三氧化二砷对腺样囊性癌ACC-2细胞p53基因表达的影响[D];青岛大学;2014年

6 刘维帅;常山酮逆转放射治疗导致Lewis肺癌细胞上皮间质转化的机制研究[D];天津医科大学;2014年

7 徐颖;曲妥珠单抗联合蒽环类药物同步及序贯应用于HER-2阳性乳腺癌辅助治疗的安全性及近期疗效的研究[D];北京协和医学院;2014年

8 陈腾飞;miR-96介导的FOXO3表达变化对肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响[D];郑州大学;2014年

9 刘晓燕;OGT糖受体底物特异性和广泛性研究[D];南开大学;2014年

10 郑昊龙;二甲双胍增加他莫昔芬对MCF-7细胞敏感性相关机制的探讨[D];辽宁中医药大学;2014年

，

本文编号：1241142