APE1在乳腺癌中的表达及其对Olaparib药物敏感性的影响

发布时间：2017-12-02 03:30

  本文关键词：APE1在乳腺癌中的表达及其对Olaparib药物敏感性的影响

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【摘要】：第一部分乳腺癌组织中APE1表达及临床意义目的:三阴性乳腺癌特征是免疫组化结果显示HER2/ER/PR均为阴性,这种类型的乳腺癌预后较差,生物学行为特殊且缺少内分泌治疗和靶向治疗的有效靶点,是制约乳腺癌临床治疗发展的瓶颈。近15%的三阴性乳腺癌患者存在DNA损伤修复基因的致病性突变,提示三阴性乳腺癌存在着与其他分子类型不同的克隆起源。在DNA碱基损伤修复中,APE1是其中的关键限速酶。在本研究中,检测APE1在乳腺癌中的表达,分析其与乳腺癌的临床病理特征的关系,及APE1对三阴性乳腺癌患者预后的影响。方法:采用免疫组化Envision两步法检测323例乳腺癌中APE1蛋白的表达,其中三阴性乳腺癌为108例。数据统计使用SPSS 21.0软件进行。采用卡方检验、Fisher精确检验法针对计数资料进行统计。生存分析采用Kaplan-Meier法。两组生存率的比较采用log rank检验进行。多因素分析使用Cox回归模型。所有统计结果进行三次以上验证,并以P0.05定义为具有统计学差异。结果:APE1在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(其中非三阴组99.3%Vs 0.7%,P0.0001;三阴组85.6%Vs 14.4%,P0.0001)。其表达与肿瘤大小,人类表皮生长因子2型受体,腋窝淋巴结状态,雌激素受体,临床分期密切相关(P0.05)。即便在预后相对不佳的腋窝淋巴结阳性组,APE1低表达也显示比APE1高表达组有更高的生存率(P=0.0427)。结论:APE1在乳腺癌组织中明显高于癌旁组织,提示可能与乳腺癌的发生相关。COX结果提示其高表达是乳腺癌患者预后不佳的独立因子,可能成为乳腺癌的潜在治疗靶点。第二部分三阴性乳腺癌中APE1对O1aparib(PARP1抑制剂)敏感性影响目的:PARP-1是DNA单链修复的重要基因,APE1也参与DNA单链损伤修复。BRCA1是DNA双链损伤修复的重要修复酶。当BRCA1缺陷且抑制PARP1功能时易产生联合致死效果。但PARP1抑制剂的临床研究并未显示出在BRCA1突变的乳腺癌中有显著的"高效",其原因不清。由于APE1与PARP1在DNA碱基切除修复通路中的作用相似,之间的关系尚不明确。是否二者之间存在相互竞争,从而影响PARP1抑制剂的疗效,有待于研究。因此,本实验构建了 BRCA1缺陷的三阴性乳腺癌HCC1937的APE1敲除株,观察PARP1抑制剂作用于敲除株和野生株后对细胞株增殖及凋亡的影响,明确PARP1与APE1的关系。方法:通过CRISPR/Cas9系统建立APE1敲除的HCC1937细胞稳定株。蛋白免疫印迹实验检测加入PARP-1抑制剂Olaparib前后野生型HCC1937细胞的APE1表达,以及APE1敲除株和野生型HCC1937中PARP1的表达。通过CCK8实验测量APE1敲除株和野生型HCC1937加入Olaparib后的IC50值和生长曲线。使用流失细胞仪检测经过Olaparib处理后的APE1敲除株和野生型HCC1937的周期和凋亡情况。结果:使用不同浓度PARP-1抑制剂Olaparib处理野生型HCC1937发现,当Olaparib为10μM时,APE1表达降低;当增加Olaparib的浓度为15μM时,APE1表达降低更加显著。在APE1敲除株HCC1937-APE1-KO中,内源性PARP1表达也比野生型HCC1937减少。使用CCK8测量,与HCC1937相比,HCC1937-APE1-KO的IC50明显增加。生长曲线表明,使用PARP1抑制剂第五天时,野生型和APE1敲除株的抑制率分别为68%和27%,说明PARP1抑制剂对野生型HCC1937杀伤力更强。使用流式细胞术测量后发现,HCC1937经过Olaparib 40μM处理后引起更明显的有丝分裂G2/M阻滞,而HCC1937-APE1-KO周期未有明显变化;且HCC1937比HCC1937-APE1-KO的凋亡率显著增加。结论:使用PARP1抑制剂作用于HCC1937野生型细胞杀伤效果更强,而敲除APE1可能产生耐药。说明APE1表达是PARP1维持功能的重要基础,APE1的缺失可能与PARP1抑制剂的耐药相关。
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9

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本文编号：1243516