泛素连接酶hrd1及氨基酸转运载体LAT1在胃癌细胞中表达水平研究

发布时间：2017-12-02 16:02

  本文关键词：泛素连接酶hrd1及氨基酸转运载体LAT1在胃癌细胞中表达水平研究

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【摘要】：目的:研究泛素连接酶hrd1(hydroxymethylglutaryl reductase degradation 1,hrd1)与L型氨基酸转运载体1(L-type amino acid transporter 1,LAT-1)在胃癌及癌旁正常细胞中的表达水平,探讨hrd1与LAT1在胃癌发生发展中的作用及其相互作用。方法:采集我院胃癌手术切除标本63例,取距癌灶边缘5cm以上的癌旁正常胃组织作为对照组。标本离体后分为两部分,一部分(约500mg)离体后1小时内放入-80℃冰箱保存,以Q-PCR及Western-blot方法检测胃癌(实验组)及癌旁组织(对照组)中hrd1及LAT1表达水平;大部分标本常规送病理科,后取病理蜡块用SP法进行免疫组化,分别检测胃癌及癌旁组织中hrd1及LAT1蛋白表达水平。结果:1免疫组化结果1.1 hrd1蛋白表达定位于胃癌细胞和正常胃黏膜中的细胞质。胃癌组织中hrd1表达明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P0.05)。hrd1表达水平与患者的年龄、性别、肿瘤分化程度、淋巴结有无转移及肿瘤临床分期等临床病理参数均无相关性,即不同年龄、性别,肿瘤分化程度及临床分期等不同的样本之间,hrd1表达水平无明显差异。hrd1表达水平与肿瘤大小有一定相关性,癌灶≥5cm的标本中,hrd1表达水平明显高于癌灶5cm的标本。1.2LAT1蛋白表达定位于细胞的细胞质及细胞核。胃癌组织中LAT-1表达水平明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P0.05)。LAT1表达水平与患者的年龄、性别、肿瘤分化程度、淋巴结有无转移等临床病理参数均无相关性,与胃癌临床分期及肿瘤大小有一定相关性,癌灶≥5cm的标本中,LAT1表达水平明显高于癌灶5cm的标本;肿瘤分期Ⅰ期、Ⅱ期的标本中,LAT1表达水平明显低于Ⅲ期、Ⅳ期的标本。2 Q-PCR实验结果基因的相对表达量用比较CT值计算,计算公式:F=2-ΔΔCT,ΔΔCT值=(胃癌组目的基因CT值-胃癌组内参基因CT值)-(癌旁组目的基因CT值-癌旁组内参基因CT值)。实验结果显示,胃癌组织中hrd1及LAT1基因相对表达量高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P0.05)。3 Western-Blot实验结果分别测出各组目的基因条带与各组内参条带灰度值,两者比值为相对灰度值,相对灰度值越大者,蛋白表达水平越高。实验结果显示,胃癌组织中hrd1与LAT1蛋白表达水平高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P0.05)。4 hrd1与LAT1在胃癌组织中表达水平的相关性分析用hrd1与LAT1相对表达量分析二者表达相关性,结果显示,hrd1与LAT1相对表达量之间存在线性趋势,根据SPSS15.0软件计算出相关系数r=0.820(P0.001),可认为胃癌组织中hrd1与LAT1表达水平有正相关关系。结论:hrd1与LAT1在胃癌细胞中表达水平均高于癌旁正常细胞,提示hrd1与LAT1可能在胃癌的发生、发展中发挥重要的作用。
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2

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本文编号：1245443