醌氧化还原酶及其抑制剂在乳腺癌增殖与迁移中的作用研究

发布时间：2017-12-04 14:02

  本文关键词：醌氧化还原酶及其抑制剂在乳腺癌增殖与迁移中的作用研究

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【摘要】：研究背景：乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一,也是女性死亡的第二大原因。醌氧化还原酶(NQO1)是一种保护细胞免受氧化损伤的黄色素酶,更是一种人体内一种非常重要的化学致癌物代谢酶。近年来发现,NQO1在黑色素瘤、胰腺癌、肝内胆管癌、肺癌和乳腺癌等多种恶性肿瘤中表达异常,并与这些肿瘤的早期诊断和不良预后关系密切,但尚未见其与乳腺癌之间的关系报道。β-拉帕醌(P-lapachone)是NQO1蛋白的一种有效抑制剂,提取于中南美洲紫檀树的树皮中,研究表明,β-拉帕醌可诱导前列腺癌、乳腺癌、白血病等多种肿瘤细胞的凋亡,也可作为一种治疗结肠癌和前列腺癌的放射增敏剂,但其在乳腺癌中的作用和机制尚不清楚。研究目的：探讨NQO1蛋白过表达在乳腺癌中的临床病理学意义及在预后评估中的临床意义；深入研究其抑制剂β-拉帕醌体外抑制乳腺癌增殖与迁移能力的作用机制。材料和方法：应用免疫组化方法在52例癌旁正常组织、22例乳腺增生组织、45例乳腺原位癌组织(DCIS)和176例乳腺癌组织中检测NQO1蛋白的表达情况,采用细胞免疫荧光实验检测NQO1在MCF-7乳腺癌细胞中的定位情况；并利用qRT-PCR和Westernblot方法检测8例新鲜乳腺癌及癌旁正常组织中NQO1基因mRNA和蛋白水平的表达,分析NQO1异常表达与乳腺癌临床病理学特征之间的相关性,生存期分析验证NQO1对患者预后评估的价值。传代培养MCF-7乳腺癌细胞株；噻唑蓝(MTT)实验检测与增殖、凋亡、EMT标志物及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达情况。对细胞增殖的抑制作用；通过划痕实验检测β-拉帕醌抑制MCF-7乳腺癌细胞迁移的能力；Western-blot法检测p-拉帕醌处理对MCF-7乳腺癌细胞中NQO1蛋白、增殖标志物、EMT标志物及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。结果：1.乳腺癌新鲜组织的Western blot及qRT-PCR方法检测显示,乳腺癌组织中NQO1的蛋白及mRNA的水平明显高于癌旁正常组织；免疫组化结果亦表明,NQO 1蛋白表达阳性率和强阳性率(84.7%、61.9%)明显高于DCIS组织(51.1%、31.1%)、乳腺增生组织(36.7%、13.6%)及癌旁正常组织(30.8%、13.5%),差异显著(P0.05)；NQO1蛋白高表达与乳腺癌患者的分化程度、临床分期、有无淋巴结转移和Her2表达水平密切相关。生存期分析显示,NQO1高表达的乳腺癌患者的无瘤生存期及10年生存期均低于NQO1低表达者伊0.01)；单因素分析显示NQO1表达联合分化程度、临床分期、淋巴结转移和Her2表达水平可以共同影响总生存率,但多因素分析结果表明,只有临床分期、NQO1及Her2表达水平是乳腺癌不良预后的独立风险因子；2.MTT实验结果表明,β-拉帕醌(浓度为41μM)给药处理后,MCF-7细胞的增殖能力明显下降(P0.05),Western blot结果显示,β-拉帕醌通过下调Skp2和DEK蛋白的表达调节参与乳腺癌细胞的增殖调控。划痕实验结果显示,β-拉帕醌(浓度为4μM)可以明显抑制MCF-7细胞的迁移能力伊0.05)。而且Western blot结果表明,β-拉帕醌主要通过下调上皮间质转化(EMT)间质标记物Snail、Vimentin、GSK-3β等的表达水平、上调EMT上皮标志物E-cadherin表达影响MCF-7细胞的迁移能力；3.p-拉帕醌可以下调MCF-7细胞中PI3K/Akt/mTOR相关信号通路蛋白p-AKT和p-PTEN的表达。结论：1.NQO1高表达与乳腺癌的预后密切相关,可能成为乳腺癌不良预后的有效分子标志物；2.p-拉帕醌体外抑制乳腺癌细胞增殖与迁移,其分子机制主要是：通过下调Skp2和DEK蛋白的表达抑制MCF-7胃癌细胞的增殖；通过EMT途径抑制胃癌细胞的迁移能力；3.β-拉帕醌体外杀伤乳腺癌癌细胞的可能分子途径是PI3K/Akt/mTOR通路。
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9

【参考文献】

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1 任建军;欧阳晓晖;苏秀兰;;胃癌发病风险与醌氧化还原酶基因多态性的关系[J];中华肿瘤防治杂志;2006年22期

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本文编号：1251220