小分子化合物MLN4924靶向NEDD8活化酶（NAE）抑制非小细胞肺癌增殖的研究

发布时间：2017-12-06 19:28

  本文关键词：小分子化合物MLN4924靶向NEDD8活化酶（NAE）抑制非小细胞肺癌增殖的研究

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【摘要】：背景和目的NEDD8是一种类泛素样蛋白,与泛素化途径相似,在细胞生理过程中主要参与稳定蛋白、调节底物蛋白活性以及转录调节等功能[4,6,71。研究证实,抑制NEDD8通路将是一个新的抗肿瘤的方法和途径。MLN4924是一种有效的、选择性的NEDD8活化酶的小分子抑制剂,能够与NEDD8活化酶(NAE)结合形成NAE-MLN4924复合物,抑制NEDD8活化酶活性,控制部分依赖于CRL酶的泛素化途径,影响相关蛋白质的降解。研究发现,NAE有望成为研发抗肿瘤药物的新靶点,MLN4924作为NAE的抑制剂具有成为新型抗肿瘤药物的希望。本研究以非小细胞肺癌细胞为研究模型,观察MLN4924对细胞生长的抑制作用,分析MLN4924干预后非小细胞肺癌细胞的增殖活性、周期分布和周期调控蛋白的表达,探讨MLN4924对细胞增殖相关信号通路的调控,明确MLN4924抑制非小细胞肺癌细胞增殖的分子机制。实验方法体外培养入非小细胞肺癌H1975细胞,MTT实验分析不同浓度MLN4924作用细胞24、48和72h对其增殖的影响；集落克隆实验分析MLN4924对细胞增殖能力的影响；PI单染法分析细胞周期分布；以及Western blot实验检测周期调控蛋白CDK4、cyclin D1和天然抑制蛋白p21、p27的表达。结果MLN4924呈剂量-时间依赖抑制非小细胞肺癌细胞的生长,其中H1975细胞对MLN4924较为敏感,不同浓度(5、10、20、40μM)的MLN4924作用48h后,存活率分别为91.3±2.6%、86.0±4.2%、82.4±4.1%、79.8±3.4%,作用72h后,存活率分别为39.3±5.7%、39.7±4.1%、35.9±2.8%、36.9±2.1%。5、10、20和40μM MLN4924作用细胞7d,均显著抑制H1975细胞形成集落克隆。10和40μM MLN4924作用细胞48h,G0/G1期细胞比例显著增加,周期调控蛋白CDK4、cyclin D1表达明显下调,其天然抑制蛋白p21、p27的表达水平显著上调。结论MLN4924具有抑制非小细胞肺癌细胞增殖的作用效应,其分子机制是通过调控周期相关蛋白的表达,将细胞阻滞于G0/G1期。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2

【共引文献】

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本文编号：1259716