p,p’-DDE对大肠癌细胞增殖的影响及机制研究

发布时间：2017-12-07 14:10

  本文关键词：p,p’-DDE对大肠癌细胞增殖的影响及机制研究

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【摘要】：p,p'-DDE(p,p'-Dichlorodiphenyldichloroethylene),是一种持续性存在在环境中的有机污染物。p,p'-DDE是DDT在体内最主要的代谢产物,在体内的积累较高。大肠癌是常见危害人类健康的恶性肿瘤,根据发生部位的不同,可分为结肠癌和直肠癌。相关流行病学调查发现p,p'-DDE可能与大肠癌的发病有关,但其具体作用机制并不清楚。本研究旨在从氧化应激、Wnt/β-catenin和Hedgehog/Gli1信号通路,探究p,p'-DDE促人大肠癌细胞增殖的分子机制,从而为评价p,p'-DDE与大肠癌发生、发展风险的相关性提供理论依据。研究内容包括以下几部分：第一部分：用10-12～10-4Mp,p'-DDE分别处理大肠癌DLDl和SW620细胞96 h后,采用MTT法和细胞计数法检测大肠细胞的存活和增殖情况。结果表明,10-12～10-7Mp,p'-DDE处理DLDl和SW620细胞96h后,明显促进大肠癌细胞的增殖。其中,在p,p'-DDE浓度为10-9M时,细胞增殖的促进作用最强。利用10-10,10-9和10-8Mp,p'-DDE处理DLDl和SW620细胞96 h,Westem印迹和荧光定量PCR法,检钡p,p'-DDE对大肠癌细胞中Wnt/β-catenin和Hedgehog/Gli1信号通路的影响。结果显示p,p'-DDE处理细胞后导致Wnt/β-catenin和Hedgehog/Gli1信号通路的激活。进一步利用RNA干扰技术分别敲减β-catenin和Gli1从而抑制Wnt/β-catenin和 Hedgehog/Gli1信号通路,然后检测p,p'-DDE对大肠癌细胞存活和增殖的影响。结果表明β-catenin或Gli1敲减,导致其下游的c-Myc和cyclinD1的表达水平降低,同时也明显抑制由p.p'-DDE所诱导的细胞增殖。第二部分：用10-10,10-9和10-8Mp,p'-DDE处理D LD1和SW620细胞96 h后,分别检测p,p'-DDE对大肠癌细胞氧化应激水平的影响。结果表明p,p'-DDE暴露提高ROS水平,降低SOD活性、GSH的含量和CAT的活性。NADPH氧化酶参与调节p,p'-DDE诱导的活性氧(ROS)的产生。进一步利用氧化应激抑制剂处理,检测氧化应激在p,p'-D DE诱导的细胞增殖中的作用。结果发现抗氧化剂处理抑制了p,p'-DDE诱导的细胞增殖。第三部分：利用抗氧化试剂处理细胞抑制P,P’-DDE诱导的氧化应激后,用Western印迹法和荧光定量PCR法检测其对p,p'-DDE诱导的Wnt/β-catenin和Hedgehog/Gli1信号通路的影响。结果显示,抗氧化剂处理后抑制了由p,p'-DDE诱导的Wnt/β-catenin和Hedgehog/Gli1订信号通路激活。综上所述,p,p'-DDE通过氧化应激介导的Wnt/β-catenin和Hedgehog/Gli1信号通路的激活促进大肠癌细胞的增殖。
【学位授予单位】：山西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.34

【参考文献】

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1 魏峰;董元华;;DDT引发的争论及启示[J];土壤;2011年05期

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本文编号：1262644