CIK细胞体外杀伤人肝癌细胞的实验研究

发布时间：2017-12-10 17:20

  本文关键词：CIK细胞体外杀伤人肝癌细胞的实验研究

  更多相关文章： CIK细胞 外周血 细胞因子 CIK细胞 肝癌细胞 细胞凋亡 细胞增值 克隆形成

【摘要】：目的探讨CIK细胞的培养及体外增值方法,观察CIK细胞体外增值的规律并对其进行表型分析。方法从健康志愿者肘静脉抽取外周血,密度梯度离心,分离出单个核细胞(PBMC),将该细胞种植于CD3单克隆抗体及包被的细胞培养瓶中。然后在培养基里加入重组人IFN-γ、IL-1α和IL-2。第0天、第3天、第6天、第9天、第12天、第15、第18天和第21天时分别用抗人CD3-FITC,抗人CD56-PE标记CIK细胞,然后上流式细胞仪进行测定CD3+、CD56+细胞比例结果CIK细胞在最初的三天增殖相对缓慢,至第15天增殖速度达到顶峰,随着培养时间的延长,CD3CD56双阳性的比例逐渐升高。结论CIK细胞体外培养方法可靠,具有明显的活性,随着时间的延长,CIK细胞的倍增明显。目的:将培养成功的CIK细胞与人肝癌细胞共培养,分析CIK细胞对人肝癌细胞增殖、凋亡以及克隆形成的影响,更好地为临床治疗HCC提供实验依据。方法:将CIK细胞分别与三种人肝癌细胞系(Hep G2,Hep3B和Huh7细胞)在同一培养体系内共同培养24h及48 h。采用流式细胞术对CIK细胞的表型进行分析,CCK-8法检测人肝癌细胞的增殖情况。通过软琼脂平板细胞克隆形成实验分析人肝癌细胞的克隆形成能力,使用Annexin V-PI双染法检测肝癌细胞的凋亡情况。RT-PCR法和Westen blotting法分别检测凋亡分子Bax和Caspase-3的m RNA及蛋白水平表达情况。结果:体外培养的CIK细胞可明显抑制三种肝癌细胞系的生长,克隆形成能力减弱,导致肝癌细胞系的凋亡(凋亡细胞比例增加,凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达水平升高),并且对Hep G2肝癌细胞系的抑制效果较Hep3B和Huh7两种肝癌细胞系更加明显。结论:在体外,CIK细胞能明显抑制肝癌细胞的增殖,促进癌细胞凋亡,且该细胞增殖与凋亡诱导具时间依赖性。
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 韩向北;孙玉红;;CIK细胞过继免疫治疗肺癌的护理体会[J];中国实用医药;2013年02期

2 魏彪;蒋文军;唐小兰;;自体CIK细胞免疫疗法治疗中晚期非小细胞肺癌的临床研究[J];成都医学院学报;2008年03期

3 高万荣;关红梅;徐玉霞;;自体CIK细胞过继免疫治疗恶性肿瘤的护理[J];医药论坛杂志;2008年04期

4 全红铨;;自体CIK细胞回输治疗癌症的护理和健康宣教[J];家庭护士;2008年12期

5 刘洋;包尔宁;杨波;卢学春;朱宏丽;韩为东;王瑶;代汉仁;姚善谦;;自体CIK细胞输注治疗老年骨髓增生异常综合征的临床研究[J];中国实验血液学杂志;2011年03期

6 袁利亚;戎吉平;俞火;陈国安;纪德香;;骨髓源性树突状细胞增强CIK细胞抗肿瘤活性的研究[J];实用临床医学;2008年12期

7 王志伟;关红梅;;CIK细胞过继免疫治疗晚期恶性肿瘤的临床研究[J];中国临床新医学;2009年09期

8 孙波;冯妍;朱哲;王柏清;;CIK治疗对癌症患者免疫力影响研究[J];中国伤残医学;2014年06期

9 张康;陈永雄;林思鸣;郭胜春;张振胜;钟运超;;恶性肿瘤患者自体CIK细胞的实验研究[J];右江民族医学院学报;2006年02期

10 王存德 ,刘坤 ,江波 ,金从国;CIK细胞在癌症患者外周血中水平及影响因素的研究[J];临床肿瘤学杂志;2003年04期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 尹富华;鲍锋;梁辉;杨素芬;刘荣春;刘寅;运美江;;肿瘤的CIK细胞过继免疫治疗观察及实验研究[A];第九届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2006年

2 张惠英;于小莉;文凤;;CIK细胞回输治疗原发性肝癌的护理[A];全国传染病护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2004年

3 杨波;脱朝伟;;采用外科原位移植技术建立人原发性胃恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植肝转移模型及CIK细胞过继免疫治疗实验研究[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年

4 王恩忠;朱亚;田林;袁薇;冯烨;徐永华;;CIK细胞的肿瘤临床前研究[A];第七届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2001年

5 张晖;王士勇;杜微丽;张远;乌兰图雅;何英;刘飒;张哲;王佳玲;武秀艳;;纤维连接蛋白诱导的CIK细胞治疗晚期癌症患者的安全性及疗效评价[A];第十二届全国肝癌学术会议论文汇编[C];2009年

6 宋英晖;任欢;徐红薇;邢淑贤;;CIK细胞对S180荷瘤小鼠抗肿瘤作用的实验研究[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年（1993—2003）论文集[C];2003年

7 艾军;李巧霞;张超;单保恩;;CIK细胞体内外抗肿瘤作用及体内分布特点研究[A];中国科协第十四届年会第十七分会场环境危害与健康防护研讨会论文集[C];2012年

8 何臣;徐军;;CIK细胞对吉非替尼耐药肺腺癌PC-9/GR细胞的杀伤效应[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年

9 武立华;艾军;张超;;CIK细胞对子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)体外杀伤作用的实验研究[A];第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议论文汇编[C];2009年

10 惠吴函;徐娟;万岁桂;刘聪艳;孙雪静;;CIK细胞对慢性粒细胞白血病G_0期CD34+干细胞的杀伤作用研究[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 张嵩;树突状细胞与CIK细胞抗肿瘤活性研究[D];复旦大学;2003年

2 彭正;IL-15基因转染人CIK细胞过继转移治疗胃癌的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2009年

3 任鹏涛;肿瘤免疫治疗中CIK细胞、Treg细胞及其相关性研究[D];河北医科大学;2009年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王远;粘附分子整合素CD11c对CIK细胞治疗胃癌疗效的影响[D];苏州大学;2015年

2 刘爱梅;细胞凋亡影响CIK细胞抗肿瘤功能的作用及其调控机制[D];广东药科大学;2016年

3 张建岭;CIK细胞体外杀伤人肝癌细胞的实验研究[D];宁夏医科大学;2016年

4 张志凯;不同来源CIK细胞的生物学特性与临床应用研究[D];广州医学院;2009年

5 苏征;激活的CIK细胞基因表达谱研究[D];天津医科大学;2007年

6 曹发明;舌癌患者自体CIK细胞的体外培养及其免疫活性的研究[D];安徽医科大学;2008年

7 周永春;脐带血单个核细胞体外诱导成CIK细胞及其抗肿瘤效应的实验研究[D];昆明医学院;2004年

8 李壮;自体及健康人CIK细胞对比治疗恶性肿瘤的初步评估研究[D];第三军医大学;2014年

9 陈娟;CIK细胞对肿瘤细胞长时间细胞毒性的研究[D];中南大学;2014年

10 白引苗;CIK细胞的体内外抗肿瘤作用及回输后体内分布特点研究[D];河北医科大学;2009年

，

本文编号：1275294