MS-275对p53突变型胃癌细胞SGC-7901的作用及相关机制研究

发布时间：2017-12-12 01:01

  本文关键词：MS-275对p53突变型胃癌细胞SGC-7901的作用及相关机制研究

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【摘要】：背景:胃癌是世界第四大常见肿瘤,其死亡率在肿瘤相关死亡原因中居第二位,我国的胃癌发病率和死亡率均居世界前三位。目前常见的胃癌治疗手段主要包括手术切除和辅助全身化疗等,对于中晚期胃癌,特别是复发性、难治性胃癌,采用传统的方法治疗效果并不理想,而且还易引起多种并发症。随着分子生物学的发展,更多的研究致力于寻找一种分子靶向治疗药物,以期达到对胃癌更好的治疗效果和更小的毒副作用。近年来的研究发现,组蛋白乙酰化和去乙酰化在改变染色体结构和调节基因转录方面具有重要作用,组蛋白的过度乙酰化与肿瘤的发生密切相关。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACIs)可抑制组蛋白的过度乙酰化,并具有抑制肿瘤细胞的生长和诱导凋亡的作用,而对正常的细胞无毒性作用。HDACIs对肿瘤细胞的选择性杀伤作用使其成为分子靶向药物的研究热点。MS-275作为苯甲酰胺类的HDACIs,其对很多实体肿瘤细胞和血液系统恶性肿瘤细胞均具有杀伤作用。我们课题组前期的研究表明,MS-275能选择性杀伤含野生型p53的胃癌细胞MKN-45。然而高达50%的胃癌细胞为p53突变型,MS-275对该类型胃癌细胞的作用及其作用机理尚不明确。目的:1.研究MS-275对p53突变型胃癌细胞SGC-7901的选择性杀伤作用;2.进一步研究MS-275体外选择性杀伤SGC-7901细胞的分子机制。方法:1.WST-1检测细胞存活率:不同浓度MS-275分别处理SGC-7901细胞和GES-1细胞后,WST-1法检测细胞存活率;2.细胞毒性分析:使用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测试剂盒,检测不同浓度MS-275处理SGC-7901细胞和GES-1细胞后,LDH释放量的改变;3.JC-1检测线粒体膜电位:利用JC-1检测MS-275处理后的SGC-7901细胞内线粒体膜电位的变化;4.流式细胞仪检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)释放量:不同浓度MS-275单独处理及加入ROS抑制剂过氧化氢酶后,流式细胞仪检测SGC-7901细胞内ROS的释放量;5.Western blotting检测不同浓度MS-275处理后,SGC-7901细胞内Trx基因在蛋白水平的表达变化;6.Western blotting和q PCR分别检测不同浓度MS-275处理后,SGC-7901细胞内周期相关基因p21、p27、p57、Cyclin B1、Cyclin D1在蛋白和m RNA水平的表达变化。结果:1.不同浓度MS-275分别处理SGC-7901细胞和GES-1细胞后,SGC-7901细胞的存活率明显下降,LDH释放量明显升高,且均呈浓度依赖性;而GES-1细胞的存活率及LDH释放量均没有受到显著影响。2.MS-275处理后的SGC-7901细胞,其内的线粒体膜电位降低,ROS释放量增加,且变化呈浓度依赖性,使用抑制剂后ROS的释放量显著降低。3.MS-275可下调SGC-7901细胞内硫氧还蛋白Trx的蛋白表达水平,且呈浓度依赖性。4.Western Blotting和q PCR结果表明,MS-275可上调细胞周期抑制因子p21、p27和p57的表达,同时下调细胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin D1的表达。结论:MS-275在体外具有选择性杀伤p53突变型胃癌细胞SGC-7901的作用,而对正常胃粘膜细胞无明显影响。MS-275发挥选择性杀伤作用的机制,一是通过氧化应激诱导肿瘤细胞发生凋亡,包括增加ROS释放量,下调Trx的表达,从而达到损伤线粒体内膜,降低线粒体膜电位,诱导肿瘤细胞发生凋亡的作用;二是通过调控细胞周期相关因子p21、p27、p57、Cyclin B1和Cyclin D1的表达,阻滞细胞周期的进程,从而达到抑制肿瘤细胞增殖的目的。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 黄辞;吴智群;宫卫东;何志;;MS-275通过上调ROS释放选择性杀伤胃癌细胞[J];现代肿瘤医学;2014年09期

2 刘瑾;任亚婵;吴智群;;组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275在体外抑制胃癌细胞的实验研究[J];中国癌症杂志;2011年08期

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本文编号：1280552