沉默PRSS1对胃癌MGC803细胞迁移侵袭的影响

发布时间：2017-12-12 21:32

  本文关键词：沉默PRSS1对胃癌MGC803细胞迁移侵袭的影响

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【摘要】：[目的]通过沉默PRSS1基因的表达,观察对胃癌MGC803细胞迁移侵袭的影响,探讨PRSS1影响胃癌细胞增殖、迁移侵袭的分子机制。[方法]1.采用免疫组织化学染色结合组织芯片(含正常胃粘膜、癌旁、高分化、中分化、低分化胃腺癌及淋巴结转移癌组织)检测胃癌组织中PRSS1蛋白的表达,并分析其表达的意义。2.利用si RNA干扰技术,构建pc DNA6.2?-GW/Em GFP-mi Ri-PRSS1干扰质粒,将其转染MGC803细胞,经杀稻瘟菌素Blasticidin S HCl筛选,建立PRSS1稳定低表达的MGC803/mi Ri-PRSS1细胞系。利用RT-PCR和Western blot检测MGC803/mi Ri-PRSS1细胞中PRSS1 m RNA和蛋白的表达。3.运用MTT法、平皿克隆形成实验、划痕愈合实验、Transwell迁移侵袭实验和流式细胞术检测PRSS1低表达对MGC803细胞增殖、细胞周期和迁移侵袭的影响。[结果]1.免疫组织化学染色结果显示:高分化、中分化、低分化胃腺癌组织及淋巴结转移癌组织中,PRSS1蛋白表达较正常胃粘膜组织、癌旁组织表达增加,且癌旁组织中的表达强于正常胃粘膜组织。2.构建pc DNA6.2?-GW/Em GFP-mi Ri-PRSS1干扰质粒,转染MGC803细胞,筛选后建立PRSS1稳定低表达的MGC803/mi Ri-PRSS1细胞系。RT-PCR和Western blot检测结果显示,干扰组MGC803/mi Ri-PRSS1细胞中PRSS1 m RNA和蛋白表达量较空白组和载体对照组中m RNA和蛋白表达量均降低(P0.05)。3.PRSS1低表达对MGC803细胞增殖的影响:1)MTT结果显示,空白组MGC803细胞的增殖率为0.814±0.003,干扰组MGC803/mi Ri-PRSS1细胞的增殖率为0.501±0.002,载体对照组MGC803/mi Ri细胞的增殖率为0.791±0.002。空白组MGC803细胞增殖率明显高于干扰组MGC803/mi Ri-PRSS1细胞(P0.05),表明PRSS1低表达后MGC803细胞的增殖活性降低(P0.05)。2)平皿克隆形成实验显示,干扰组MGC803/mi Ri-PRSS1细胞的克隆数为23±2个,空白组MGC803细胞和载体对照组MGC803/mi Ri细胞的克隆数分别为98±5个和89±3个,分别较干扰组MGC803/mi Ri-PRSS1细胞多75±3个和66±4个(P0.05),表明PRSS1低表达后MGC803细胞集落形成能力减弱(P0.05)。4.PRSS1低表达对MGC803细胞迁移侵袭的影响:1)划痕愈合实验显示,划痕24h小时末空白组MGC803细胞的迁移距离为188±8um,干扰组MGC803/mi Ri-PRSS1细胞和载体对照组MGC803/mi Ri细胞的迁移距离分别为105±3um和179±6um。空白组MGC803细胞和载体对照组MGC803/mi Ri细胞迁移距离分别较干扰组MGC803/mi Ri-PRSS1细胞多83±5um和74±3um(P0.05),表明PRSS1低表达后MGC803细胞迁移能力减弱(P0.05)。2)Transwell迁移实验显示,空白组MGC803细胞迁移数为267±36个,干扰组MGC803/mi Ri-PRSS1细胞迁移数为60±8个,载体对照组MGC803/mi Ri细胞迁移数为245±32个。与空白组MGC803和载体对照组MGC803/mi Ri细胞比较,干扰组MGC803/mi Ri-PRSS1细胞迁移数分别少207±28个和185±24个(P0.05),表明PRSS1低表达后MGC803细胞迁移能力降低(P0.05)。3)Transwell侵袭实验显示,空白组MGC803细胞和载体对照组MGC803/mi Ri细胞的穿膜细胞数分别为48±8个和40±7个,干扰组MGC803/mi Ri-PRSS1细胞穿膜细胞数为15±4个。空白组MGC803细胞和载体对照组MGC803/mi Ri细胞分别与干扰组MGC803/mi Ri-PRSS1细胞比较,其穿膜细胞数分别多33±4个和25±3个(P0.05),表明PRSS1低表达后MGC803细胞侵袭能力降低(P0.05)。5.PRSS1低表达对MGC803细胞周期的影响:流式细胞术显示,与空白组MGC803细胞和载体对照组MGC803/mi Ri细胞比较,干扰组MGC803/mi Ri-PRSS1细胞G0/G1期比率增加,而S期比率则降低(P0.05),表明PRSS1低表达后MGC803细胞的发生周期阻滞。[结论]1.PRSS1蛋白在胃癌组织中高表达,与胃癌的分化程度、淋巴结转移及临床分期密切相关。2.沉默PRSS1表达MGC803细胞的增殖与迁移侵袭能力降低。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2

【参考文献】

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1 Dong Yi Kim;Jae Kyoon Joo;Seong Yeob Ryu;Young Jin Kim;Shin Kon Kim;;Factors related to lymph node metastasis and surgical strategy used to treat early gastric carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2004年05期

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本文编号：1284056