肾上腺皮质癌中新型分子靶点的筛选及其意义

发布时间：2017-12-17 07:06

  本文关键词：肾上腺皮质癌中新型分子靶点的筛选及其意义

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【摘要】：目的:肾上腺皮质癌(adrenocortical carcinoma,ACC)是一种较少见的肾上腺皮质细胞来源的具有内分泌功能的恶性肿瘤,该肿瘤预后普遍不佳。而肿瘤相关性血管生成与肿瘤进展过程密切相关,并且参与了肿瘤远处转移等生物学过程。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是一种具有高效能的促血管形成的糖蛋白,其在重塑细胞外基质、生成炎症因子、生成造血干细胞等方面发挥相当重要的作用,进而与内皮细胞生长增殖以及迁移等行为具有相关性。而类固醇生成因子1(steroidogenic factor-1,SF-1)是一种核受体转录因子,可通过与血管生成素2(Angiopoietin 2,Ang 2)的相互作用,进而与酪氨酸激酶受体Tie2间接发生功能上的连接,后者可调节VEGF的功能,从而调整新生血管形成的全过程。我们通过翻阅各种不同的文献,发现上述两种指标在肾上腺皮质癌中研究并不多,本实验通过免疫组织化学及形态学定量分析,对良性肾上腺皮质腺瘤以及ACC患者肿瘤标本中上述两者的染色情况进行分析,同时采用CD34特异性标记血管内皮细胞,从而检测微血管密度(microvessel density,MVD)的染色情况,同时结合既往病历资料,从而探讨VEGF、SF-1在肾上腺肿瘤进展及新生血管生成过程中的意义。方法:1、选取住院时间处于1990年5月-2012年7月,在上海瑞金医院手术切除肿瘤,同时具有完整临床、病理数据的肾上腺皮质肿瘤石蜡标本共52例。将其依据肿瘤性质分为肾上腺皮质腺瘤组(良性组)25例,肾上腺皮质癌组(恶性组)27例。2、采用免疫组化技术,对良、恶性组中SF-1、VEGF相关指标的表达情况进行检测与分析。并采用半定量积分计数法对肿瘤性质进行加权评分。对细胞染色特征的判定主要来源于细胞内的染色颗粒情况与阳性染色所占比例两种指标进行加权。两者之和处于0-2分之间判定为染色阴性(-),3分为一般阳性(+),4分为中度阳性(++),5-6分为染色强阳性(+++)。肿瘤内MVD计数:首先在低倍物镜(x40)下随机选取高血管密度区,随后在高倍镜(x400)下随机选用并计数3个视野内被CD34阳性染色的血管数,分析并计算上述的平均值作为MVD值(微血管数/视野)。3、分析并对比良、恶性组间SF-1、VEGF指标的表达情况及MVD的区别。结果:1、SF-1在ACC组中呈高表达(20/27,74.07%),在良性肾上腺腺瘤组表达低(7/25,28.00%),两组之间SF-1的表达率有显著性差别(P0.05)。VEGF在ACC组中呈高表达(19/27,70.37%),在良性组中表达较低(8/25,32.00%),VEGF在两组之间的表达情况有统计学意义(P0.05)。2、微血管密度(MVD)在ACC组中的表达为(69.22±22.56)/视野,良性组中为(27.76±12.75)/视野,两者之间有显著性差异(P0.05)2、3、Spearman等级相关分析结果提示,SF-1的表达和MVD呈正相关(r,s=0.856,P0.0001),VEGF的表达和MVD呈正相关(r,s=0.764,P0.0001),提示在ACC患者的肿瘤新生血管形成的过程中可能涉及了SF-1、VEGF的作用。结论:肾上腺皮质癌组织中SF-1、VEGF的表达要高于良性肾上腺皮质腺瘤,同时SF-1、VEGF的表达情况分别与MVD有一定的正相关,提示上述两种指标均可能与ACC肿瘤相关血管形成有关。目的:通过构建特定的小干扰RNA特异性沉默胰岛素类似物生长因子1受体(IGF1R)基因,检测人类肾上腺皮质癌细胞株SW13增殖及凋亡在受体沉默后的变化情况,探讨IGF1R在肾上腺皮质癌中的意义,从而为人类肾上腺皮质癌的靶向治疗提供依据。方法:使用免疫荧光技术对人类肾上腺皮质癌细胞系SW13中IGF1R蛋白的表达进行定性分析。同时依据人类IGF1R的c DNA序列合成其蛋白特异性Si RNA,通过脂质体将其转染SW13细胞,从而特异性沉默IGF1R基因,然后在转染后24小时后通过实时定量Realtime PCR检测Si RNA对靶基因m RNA的沉默作用,并且使用western blot检测其靶蛋白的表达情况,分析Si RNA对IGF1R的沉默效率。筛选出干扰效率最高的Si RNA,再通过MTT法测定转染后细胞增殖活性,流式细胞仪测定细胞凋亡状态,并进行统计学分析。结果:1、免疫荧光实验证实人肾上腺皮质癌细胞SW13中可见IGF1R的阳性表达;2、3种不同的针对IGF1R的Si RNA序列均能够有效下调SW13细胞IGF1R m RNA水平,而通过western blot检测也发现在蛋白水平出现IGF1R蛋白的表达减低。从中筛选出沉默效率最高的Si RNA-2403;3、使用Si RNA-2403特异性沉默IGF1R基因,能够有效抑制SW13细胞增殖以及诱导细胞凋亡。结论:IGF1R基因沉默能够诱导肾上腺皮质癌细胞凋亡,抑制其增殖过程,提示IGF1R在促进肾上腺皮质癌肿瘤生长中起着重要作用,有望成为ACC靶向治疗的新的位点,同时为肿瘤靶向治疗在ACC中应用提供相应的理论依据。
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R736.6

【参考文献】

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1 宿恒川;黄欣;戴军;周文龙;黄宝星;曹万里;沈周俊;孙福康;;PI3K/AKT/mTOR信号通路在肾上腺皮质癌组织的表达特点[J];现代泌尿外科杂志;2014年02期

2 Helen X. Chen;Elad Sharon;;IGF-1R as an anti-cancer target—trials and tribulations[J];Chinese Journal of Cancer;2013年05期

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本文编号：1299167