调控自噬对二氢青蒿素诱导膀胱癌细胞凋亡影响的体外研究

发布时间：2017-12-17 10:23

本文关键词：调控自噬对二氢青蒿素诱导膀胱癌细胞凋亡影响的体外研究

【摘要】：目的:体外研究二氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)和自噬抑制剂联合用药抑制膀胱癌T24和5637细胞增殖的情况并探究其可能机制。方法:采用不同浓度(0、12.5、25、50、100μmol/L)的二氢青蒿素及加入自噬抑制剂3-MA(5mmol/L)分别处理膀胱癌T24和5637细胞24h、48h、72h后,通过噻唑蓝(MTT)实验分析细胞存活率,Annexin V/PI双染和流式细胞仪测定细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡标记蛋白procaspase-3、t-PARP和cleaved-PARP的表达水平。50μmol/L二氢青蒿素作用于膀胱癌T24细胞24h后,丹酰戊二胺(monodansylcadaverine,MDC)染色后采用荧光显微镜对自噬进行形态观察,透射电子显微镜(transmission electron microscopy,TEM)观察自噬体超微结构,Western blot检测自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达。利用统计学方法原理,计量资料采用完全随机方差分析,计数资料比较采用X2检验;计量资料比较采用LSD-t检验,P0.05时差异显著,有统计学意义。结果:二氢青蒿素(DHA)抑制膀胱癌T24和5637细胞的增殖并诱导其凋亡,作用呈浓度和时间依赖性,与空白对照组比较差异有统计学意义(p0.05);与空白对照组、3-MA和DHA单药组相比,自噬抑制剂3-MA和DHA联合用药可增加膀胱癌细胞的凋亡率,有统计学意义(p0.05)。荧光显微镜下观察到MDC荧光染色阳性的自噬泡呈点状结构分布在细胞核的胞浆内。透射电子显微镜下观察到多个双层膜包裹胞质形成的自噬体。Western blot检测结果显示:二氢青蒿素处理膀胱癌T24细胞后,与对照组相比,自噬相关蛋白LC3、Beclin-1及凋亡标记蛋白cleaved-PARP的表达量增加,而自噬相关蛋白p62和凋亡标记蛋白procaspase-3、t-PARP表达水平降低;加入自噬抑制剂3-MA后,与对照组相比,cleaved-PARP的表达量增加及procaspase-3、t-PARP表达水平降低这一趋势更加明显。结论:1、二氢青蒿素可抑制膀胱癌T24和5637细胞的增殖,具有抗癌作用;2、二氢青蒿素诱发膀胱癌T24细胞凋亡时产生自噬现象,且自噬在细胞凋亡过程中起保护性作用;3、抑制自噬可增强二氢青蒿素诱导的膀胱癌细胞凋亡,为膀胱癌的治疗提供了一种潜在的方法。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.14

【参考文献】

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