CIK联合黄芪多糖对Hela细胞体内外杀伤效应的研究

发布时间：2017-12-18 17:04

  本文关键词：CIK联合黄芪多糖对Hela细胞体内外杀伤效应的研究

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【摘要】：目的:伴随着生物技术的不断进展,大量的新型生物治疗疗法及相应的制剂陆续进入临床前实验阶段或直接临床使用,过继性免疫细胞疗法已经成为了继手术治疗、放射治疗和化学治疗后的第4种肿瘤治疗手段,对于机体残存的转移肿瘤病灶的治疗效果尤其显著,是防治肿瘤复发的有效手段。基于现代生命科学和生物技术的发展,细胞免疫疗法不仅可以作为前三种治疗的补充手段,甚至对于前三种方法治疗无效的肿瘤患者,细胞免疫治疗也显示出延长患者生命、改善生存质量,甚至扭转肿瘤病情发展的作用。过继细胞免疫疗法是肿瘤生物治疗的一种手段,最近十年来应用细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK细胞)是新一代过继细胞治疗肿瘤的新型选择之一。技术成熟的CIK细胞是将患者或者健康人采集来的外周血单个核细胞经多种细胞因子在体外共同培养特定时间后收获而来的多样性的异质免疫细胞。其中的CIK细胞由于同时表达人CD3+和CD56+两种细胞表面蛋白分子,因此又被称为NK细胞样T淋巴细胞,兼具有人体内适应性免疫应答中T淋巴细胞的肿瘤杀伤活性和自然杀伤细胞的非MHC限制性。这意味着CIK在增强机体自身的免疫监视和免疫杀伤功能,杀伤微小癌灶,抑制原发肿瘤细胞转移等方面具备独特的治疗优势。经过多年临床统计显示,CIK细胞对消化系统和呼吸系统的多种恶性肿瘤均有不错的治疗效果。然而,如何评价CIK的疗效,尤其是对于肿瘤细胞的侵袭和转移的抑制效果,以及如何监控残存肿瘤的复发,是当前肿瘤生物治疗研究的一个热点问题。黄芪多糖是蒙古黄芪或膜荚黄芪的主要有效成分,其干燥根经提取后可获得多成分的水溶性杂多糖,由己糖醛酸、葡萄糖、果糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸等组成,是有效地多特异性和分特异性的免疫促进剂或调节剂。黄芪多糖口服进入人体内后,能逆转化疗药物引起的人体免疫抑制作用吗,增强人单核巨噬细胞的吞噬活性,对人固有免疫系统的自然杀伤细胞释放多种活性物质,例如黄芪多糖可提高创伤后活化T淋巴细胞内白介素2基因转录表达,从而部分调节化疗后或手术后肿瘤患者细胞免疫功能低下。此外,黄芪多糖经由诱导人外周血淋巴细胞产生干扰素等免疫活性蛋白或多肽来提高的自然杀伤细胞抗肿瘤活性和杀伤效力。研究表明,黄芪多糖自身有一定的抗肿瘤的作用,且与临床应用的生物制剂白介素-2的作用相似,联合应用时对白介素-2抗肿瘤效应有显著的增强作用。基于国内外对于CIK细胞和黄芪多糖在抗肿瘤研究中的最近进展,本论文重点探讨细胞因子诱导的杀伤细胞联合中草药制剂黄芪多糖对宫颈癌Hela细胞株的体内和体外杀伤效应。方法:清晨采集10名健康人空腹外周静脉血,使用人淋巴细胞分离液和密度梯度离心法提取外周血单个核细胞后进入体外培养阶段,在实验室使用序贯的重组人细胞因子和抗人单克隆抗体定向诱导和增殖CIK细胞,大约在体外培养的第14天,使用流式细胞仪检测后发现,具备CIK细胞表型的细胞比例从0.19%上升到35.2%。首先在体外检测CIK细胞和黄芪多糖本身对Hela细胞株的杀伤活性,分别检测应用不同效靶比的CIK细胞与体外培养的Hela细胞来检测CIK细胞的杀伤活性,不同浓度的黄芪多糖对Hela细胞的直接作用,以及不同效靶比的CIK细胞与最大浓度的黄芪多糖联合作用的杀伤活性。体内实验中,在Balb/c小鼠皮下接种宫颈癌Hela细胞株,实验共四组:生理盐水对照组,单独黄芪多糖组,单独CIK组和黄芪多糖联合CIK组,细胞和黄芪多糖经尾静脉注射进入实验小鼠,观察小鼠肿瘤的生长情况以及各组对荷瘤小鼠的抑瘤作用。结果:10位健康人外周血,在提取外周血单个核细胞后,通过实验室体外诱导分化和扩增,细胞总数显著扩增,经体外流式细胞仪检测,CD3+CD56+双阳性的CIK细胞比例不断上升。人源性的CIK细胞在不同效靶比下对Hela细胞都显示出有杀伤活性,且杀伤活性随细胞浓度提高而不断增强;黄芪多糖在不同浓度(0.25、0.5和1mg/m L)下对于Hela细胞均无体外直接杀伤活性;三种效靶比的人源性CIK细胞联合黄芪多糖后,其对Hela细胞的体外杀伤活力较相同效靶比的CIK细胞并无明显提高。体内实验表明,黄芪多糖联合CIK能够显著抑制肿瘤的生长,部分小鼠的移植肿瘤完全消失,其抑瘤率可达80.6%,与单独CIK细胞治疗组和单独黄芪多糖治疗组相比差异有统计学意义(P0.01)。结论:黄芪多糖能提高CIK细胞在体内抗宫颈癌细胞活性,可用于临床上宫颈癌的过继性免疫治疗。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.5

【参考文献】

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本文编号：1304920