抗甲状腺髓样癌人源单链抗体的筛选及在荷瘤裸鼠模型中的放射免疫显像研究

发布时间：2017-12-21 01:25

  本文关键词：抗甲状腺髓样癌人源单链抗体的筛选及在荷瘤裸鼠模型中的放射免疫显像研究　出处：《重庆医科大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的:从大容量甲状腺髓样癌(medullary thyroid carcinoma,MTC)人源单链抗体(single chain variable fragments,scFv)库中筛选出特异性抗MTC单链抗体,131I标记,研究荷瘤裸鼠131I-scFv放射免疫显像(radioimmunoimaging,RII)特点。方法:对抗甲状腺髓样癌细胞单链抗体库展开了5轮循环富集,筛选出的阳性克隆感染E.coli HB 2151;诱导该抗体可溶性表达并纯化抗体;SDS-PAGE和Western blot检测抗体表达和相对分子质量;ELISA检测可溶性scFv的特异性和免疫活性;四甲基偶氮唑盐比色分析法分别测定设置每组的吸光度(OD值),计算细胞抑制率。氯胺T法对可溶性scFv行131I标记并进行纯化,三氯醋酸沉淀法测定标记率,标记抗体的放射化学纯度、室温及血清稳定性由纸层析法测定。建荷MTC细胞(TT细胞)裸鼠,注射131I-sc Fv,分析131I-sc Fv在裸鼠体内分布情况,并于注射药物12、24、48、72 h行SPECT正位静态显像,当肿瘤组织显像符合要求时行SPECT/CT融合图像。结果:经5轮筛选,特异抗体明显富集。SDS-PAGE、Western blot结果显示MTC特异性抗体分子量为28 kD左右。ELISA结果显示,TT细胞(人甲状腺髓样癌细胞)组的OD值(0.41±0.12)较SW 480细胞(人结肠癌细胞)组(0.20±0.03)、TEC细胞(人甲状腺上皮细胞)组(0.13±0.01)、PBS空白对照组(0.07±0.01)明显增加(P=0.000)。MTT法结果显示,TT细胞组和SW 480细胞组在scFv浓度为0.1、1、10μmol/L时,两组细胞株间抑制率有统计学意义,在scFv浓度为10μmol/L时,对TT细胞有最高的抑制率(0.59±0.15)%。抗体标记率为(78.60±0.08)%,放化纯度为(87.10±0.78)%,各个时间点的放化纯度均在90%以上。荷瘤裸鼠体内研究结果显示,131I-scFv的放射性瘤/血、瘤/肌肉比值在48 h时为最高。RII显示,48 h时肿瘤组织与全身组织显像对比最为清楚,此时融合图像较清楚显示肿瘤部位的放射性浓聚情况。结论:利用噬菌体抗体库技术成功获得了抗MTC人源单链抗体,标记后该抗体生物活性较高,荷瘤裸鼠行RII结果较好。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R-332;R736.1

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

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本文编号：1314166