前列腺癌核酸适配体的筛选及性质考察

发布时间：2017-12-21 18:34

  本文关键词：前列腺癌核酸适配体的筛选及性质考察　出处：《湖南大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： 前列腺癌 核酸适配体 Cell-SELEX 转移潜能 DU145

【摘要】：前列腺癌在男性中是除肺癌外最常见的恶性肿瘤。目前,针对前列腺癌的早期筛查诊断的主要依据是前列腺癌特异性抗原(PSA)水平的变化,然而这种方法缺乏特异性且PSA在非癌变的前列腺细胞中也会变化。另外,目前临床上治疗癌症时面临的一个巨大的挑战是肿瘤的转移性,其在癌症的发生和转变过程中往往具有很大的危险性。因此,寻找能特异性识别具有转移潜能的前列腺癌的生物分子,用于早期检测、分型及治疗是目前前列腺癌生物医学研究领域的前沿课题。核酸适配体是20-80 nt的单链DNA或者RNA分子,通过形成三维结构与靶标分子特异性识别并结合。由于核酸适配体具有易于合成和修饰,特异性好,与靶标结合亲和力高等优点,近年来在生物医学,生物化学等领域有了飞速发展,成为研究肿瘤的一种新颖而高效的手段,在未来生物医学和临床研究中具有不可估量的应用前景。在此背景下,我们利用核酸适配体筛选技术得到一条特异性针对前列腺癌的核酸适配体,为前列腺癌的早期诊断,分型和治疗提供了新的线索和研究方向。本论文基于Cell-SELEX技术,以雄激素非依赖性前列腺癌细胞株DU145为研究对象,开展能特异识别前列腺癌的核酸适体筛选工作,对筛选得到的核酸适配体性质进行了多方面的考察,并对其靶标类型进行了初步鉴定,本论文所筛选出来的核酸适配体有望成为前列腺癌诊断和治疗的新型标记分子,并对日后发现前列腺癌的分子标记物提供了重要线索。本论文主要研究内容包括：(1)前列腺癌细胞株DU145特异性核酸适配体的筛选本工作以雄激素非依赖性前列腺癌细胞株DU145为靶细胞,以人正常前列腺基质永生化细胞株WPMY-1为对照细胞,采用Cell-SELEX技术进行核酸适配体的筛选。经过18轮筛选后,通过高通量测序,挑选和验证,得到一条能与前列腺癌细胞株DU145特异结合的核酸适配体DML-7。(2)核酸适配体DML-7的性质考察为了使得到的核酸适配体能更好地应用于前列腺癌的检测和治疗,我们对核酸适配体DML-7的多方面性质进行了考察。通过核酸适配体的二级结构模拟和流式细胞检测技术分析了该核酸适配体删减后与靶细胞的结合情况,确定筛选所得到的核酸适配体两端引物序列在结合靶标上也起着重要的作用,是不可缺少的部分。通过亲和力检测实验表明核酸适配体与靶细胞DU145的解离常数在纳摩尔范围内,为49.4nM+5.1。通过在血清中的稳定性实验表明,DML-7即使在未做任何修饰的情况下仍具有很高的稳定性,具有应用在活体中的潜能。并且,内在化实验表明在生理情况下DML-7能进入细胞,因而可以作为特异性的分子探针,为应用于靶向给药和靶向治疗奠定了重要的基础。进一步通过用不同蛋白酶处理细胞膜表面蛋白的实验表明,该条核酸适配体可能与细胞膜上的某种可抵抗酶作用或者糖基化程度比较高的蛋白质结合。另外,还考察了DML-7识别其他肿瘤细胞的能力,DML-7能与雄性激素非依赖性前列腺癌细胞和部分贴壁细胞特异性的结合,而不能与悬浮细胞结合,推测DML-7与细胞结合的靶标分子可能与细胞的粘附和转移相关。通过组织芯片成像技术从临床复杂样品的组织水平考察了DML-7特异性识别肿瘤的能力,结果表明其在组织水平能很好的与前列腺癌结合,并且随着转移潜能的增加识别能力逐步提高。
【学位授予单位】：湖南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.25

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本文编号：1316774