MicroRNA-497抑制炎症相关基因在结肠癌细胞的表达

发布时间：2017-12-24 09:22

  本文关键词：MicroRNA-497抑制炎症相关基因在结肠癌细胞的表达　出处：《山西医科大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： miR-497 结肠癌 炎症相关基因 GO功能注释 pathway分析

【摘要】：目的:建立高表达miR-497的结肠癌细胞模型;分析miR-497高表达结肠癌细胞的基因表达谱,筛选差异表达基因,探索在结肠癌细胞中miR-497对炎症相关基因的影响。方法:1、高表达miR-497的结肠癌细胞模型的建立构建miR-497慢病毒表达载体并进行慢病毒包装;miR-497慢病毒感染结肠癌细胞,用流式分选技术结合嘌呤霉素筛选感染阳性的细胞;采用细胞计数法绘制高表达miR-497的结肠癌细胞及对照细胞的生长曲线。2、全基因组表达芯片筛选差异表达基因并验证应用全基因组表达芯片筛选miR-497过表达后差异表达基因;MAS3.0生物信息注释系统对差异表达基因进行GO分析和KEGG pathway分析;利用生物信息学网站Targetscan对miR-497进行靶基因预测,并对预测靶基因与下调基因取交集得到的基因进行pathway分析,筛选与炎症相关的基因;RT-qPCR方法验证差异基因在稳定转染的结肠癌细胞及结肠癌组织中的表达。结果:1、成功构建了稳定高表达miR-497结肠癌细胞株,GFP阳性细胞达90%以上,miR-497表达量是对照组的77倍(P0.05);miR-497稳定高表达的结肠癌细胞增殖减慢。2、筛选出Absolute Fold change 3倍以上的差异基因共1053个,其中表达上调基因471个,下调基因582个;经GO分析,下调基因主要参与转录调控、免疫反应、信号转导等生物学过程;KEGG pathway分析表明,下调基因主要参与MAPK、细胞因子与受体、Jak-STAT等炎症相关信号通路;下调基因中预测出miR-497可能的靶基因有125个,富集于MAPK和细胞因子与受体、Jak-STAT等信号通路;RT-qPCR验证结果表明,选取的15个炎症相关基因中有10个基因在miR-497高表达的HCT116细胞中表达下降,与芯片结果一致;其中IL29、TNFSF15、IL11、JAK3和IL2Rβ等5个基因在mi R-497低表达的结肠癌组织中表达上调。结论:稳定高表达miR-497的结肠癌细胞建立成功;miR-497抑制炎症相关基因在结肠癌细胞的表达
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.35

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本文编号：1327805