新型喜树碱类似物FL118对顺铂耐药非小细胞肺癌抑制作用的研究

发布时间：2017-12-24 14:01

本文关键词：新型喜树碱类似物FL118对顺铂耐药非小细胞肺癌抑制作用的研究　出处：《青岛大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:通过观察新型喜树碱类似物FL118对顺铂耐药非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系的增殖、迁移和顺铂耐药的抑制作用,探讨FL118对抗耐顺铂肿瘤细胞的作用机制,为FL118临床治疗顺铂耐药肺癌提供理论支持。方法:常规培养人非小细胞肺癌细胞系A549和其顺铂耐药细胞A549/DDP,通过MTT法检测A549/DDP的耐药指数、免疫细胞化学方法检测耐药蛋白P-gp、ERCC1的表达,从而验证A549/DDP细胞的顺铂耐药性。实验分组:A549组,A549/DDP组,A549顺铂处理组,A549/DDP顺铂处理组,A549+FL118处理组,A549/DDP+FL118处理组。MTT法检测各组细胞存活率;细胞划痕实验与Transwell小室实验检测细胞迁移与侵袭能力;实时荧光定量PCR、免疫细胞化学和Western blot方法分别检测耐药相关蛋白P-gp、ERCC1、上皮间质转化(EMT)免疫标志E-cadherin、Vimentin以及Survivin的m RNA和蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期变化。结果:1.与A549细胞相比,A549/DDP细胞形态呈长梭形、排列呈旋涡状或放射状,类似纤维细胞;MTT检测A549/DDP耐药指数为76.9(p0.05),免疫细胞化学显示A549/DDP细胞中耐药蛋白P-gp、ERCC1表达显著增高,同时上皮标志物E-cadherin表达减弱,间质标志物vimentin表达增强,证实A549/DDP的顺铂耐药性,而且具有上皮间质转化特性。2.MTT方法发现FL118对A549/DDP细胞的生长有明显抑制作用,且抑制作用呈现时间和浓度依赖性,100n M FL118作用48h后对A549/DDP细胞抑制作用显著强于A549细胞(p0.05)。3.划痕实验检测结果发现FL118作用后肺癌细胞的迁移能力下降(p0.05),Transwell小室实验结果显示FL118明显抑制肿瘤细胞的侵袭能力(p0.05)。4.免疫细胞化学实验及Western blot实验结果显示,耐药细胞A549/DDP Survivin蛋白表达较A549显著,FL118作用后,耐药细胞中Survivin表达降低,并且耐药蛋白P-gp、ERCC1表达也明显降低;E-cadherin表达增强,Vimentin表达下降。5.实时荧光定量PCR结果显示,FL118可抑制Survivin基因表达,但对耐药相关基因MDR1/P-gp、ERCC1无抑制作用,而E-cadherin、Vimentin m RNA的表达与蛋白表达结果相一致。6.流式细胞术检测FL118作用后,A549及A549/DDP细胞均阻滞在S期(P0.05)。结论:FL118通过靶向抑制Survivin的表达,使顺铂耐药A549/DDP细胞周期被阻滞在S期,抑制耐药细胞的生长,且其抑制作用呈浓度-时间依赖性;FL118不仅明显抑制顺铂耐药细胞的运动侵袭能力,而且可以通过下调耐药相关蛋白表达增强耐药细胞对FL118的敏感性,进一步明确了FL118较强的对抗耐药和侵袭性肿瘤作用。同时,FL118可以逆转耐药细胞的上皮间质转化表型,提示FL118对抗耐药性肿瘤作用机制新的思路。本研究为FL118抗癌机制的研究提供新思考,也为FL118临床治疗顺铂耐药性肺癌提供理论依据。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2

【参考文献】