全人源抗Her2单克隆抗体的制备及其在乳腺癌细胞荧光标记中的应用

发布时间：2017-12-24 23:01

本文关键词：全人源抗Her2单克隆抗体的制备及其在乳腺癌细胞荧光标记中的应用　出处：《吉林大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：荧光单分子肿瘤标记技术主要针对肿瘤细胞的特定靶点,利用高特异性的抗体分子与非生物毒性的荧光聚合物量子点相偶联,组装成具有特异性靶向特定肿瘤细胞的免疫荧光标记物。可以及时、准确的发现肿瘤,确定相关靶点的有效性。单分子肿瘤标记已经成为了继分子靶向药物后的另一研究热点。人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor2,Her2)是表皮生长因子受体家族的一员,研究表明其过表达会影响细胞生长、发育和分化,对多种肿瘤细胞的扩增和转化起到关键作用。尤其在乳腺癌中,超过1/3的患者过表达Her2,因此,Her2是乳腺癌诊断和治疗的一个重要靶点。目前,针对Her2开发出来的单克隆抗体已经在乳腺癌疾病的诊断和治疗中发挥了重要作用,但在临床肿瘤标记研究中多使用鼠源抗体或人源化抗体,这类抗体在人体内依然存在着人抗鼠抗体反应(HAMA)的风险。利用抗体工程技术开发高亲和性的全人源单克隆抗体,将会克服这方面的问题。本研究以Her2作为靶点,从大容量噬菌体展示全人源Fab抗体库中,利用固定偶联的Her2抗原,经过4轮筛选,获得一株有高抗原结合能力的噬菌体克隆。经表达得到Fab和Ig G1抗体蛋白,ELISA分析发现这两种抗体可以特异结合Her2蛋白。SPR实验结果表明,这两种抗体对Her2抗原的亲和力分别为15n M和1.01n M,表明该抗体具有高抗原亲和力。流式细胞技术分析也证明抗体可以特异性的识别高表达Her2乳腺癌细胞SK-BR3(Her2+),而不结合MCF-7细胞(Her2-)。通过对该Ig G1抗体进行叠氮标记修饰,与一个新型高稳定性荧光聚合物量子点(Pdots)上的DBCO官能团进行点击化学连接,制备出可以特异性靶向结合乳腺癌细胞的免疫荧光标记物,并利用共聚焦显微技术针对SK-BR3乳腺癌细胞进行单分子乳腺癌细胞标记学研究,发现其可以特异性的识别SK-BR3,并对细胞进行荧光标记。综上所述,本论文筛选得到一株高亲和性识别人Her2的全人源单克隆抗体,可以特异性的识别Her2+乳腺癌细胞,此抗体与Pdots偶联之后,可以特异性结合乳腺癌细胞并实现对细胞的荧光标记。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9

【参考文献】