盐酸普鲁卡因对人白血病HL-60细胞ID4基因甲基化状态及细胞增殖的影响

发布时间：2017-12-25 21:10

本文关键词：盐酸普鲁卡因对人白血病HL-60细胞ID4基因甲基化状态及细胞增殖的影响　出处：《桂林医学院》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:研究盐酸普鲁卡因对人急性髓系白血病(AML)细胞株HL-60细胞DNA结合抑制因子4(ID4)基因甲基化状态及细胞增殖的影响,探寻白血病基因治疗的潜在靶点。方法:体外培养人AML细胞株HL-60细胞,使用不同浓度的盐酸普鲁卡因处理细胞,应用CCK8法检测盐酸普鲁卡因作用24h、48h、72h后HL-60细胞的增殖变化;采用甲基化敏感性高分辨率熔解(MS-HRM)法测定盐酸普鲁卡因作用48h后HL-60细胞ID4基因甲基化程度的改变;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测盐酸普鲁卡因作用48h后细胞ID4基因mRNA表达水平的变化;免疫印迹(WB)法测定盐酸普鲁卡因作用48h后细胞ID4蛋白表达情况的变化。使用SPSS17.0统计软件分析处理数据,方差齐者比较采用独立样本t检验或单因素方差分析,方差不齐者采用非参数检验。结果:(1)CCK8法检测结果显示:不同浓度的盐酸普鲁卡因(2mmol/L、4mmol/L、6mmol/L)处理HL-60细胞24h后抑制率分别为8.39%、16.14%、20.74%;48h后抑制率分别为24.20%、41.41%、50.74%;72h后抑制率分别为39.03%、50.48%、65.27%。各实验组细胞抑制率与对照组相比差异均有统计学意义(P0.05)。相同作用时间下,抑制率随药物浓度增加而增大,各浓度组之间比较差异均有统计学意义(P0.05);相同浓度下,抑制率随作用时间的延长而增大,且在48h时抑制率增加的幅度最大,各作用时间组之间比较差异有统计学意义(P0.05)。(2)MS-HRM法检测结果显示:对照组HL-60细胞的ID4基因启动子区域CPG岛处于高甲基化状态,经盐酸普鲁卡因作用48h后,ID4基因启动子区域CPG岛的甲基化程度降低,且在2-6mmol/L范围内随药物浓度增加而进一步下降。(3)qPCR检测结果显示:经不同浓度的盐酸普鲁卡因处理HL-60细胞48h后,细胞ID4基因mRNA的表达量较对照组明显增加,在2-6mmol/L的范围内随药物浓度增加而不断增加,且各组之间比较差异均有统计学意义(P0.05)。(4)WB检测结果显示:未经盐酸普鲁卡因处理的HL-60细胞ID4蛋白的相对表达水平为0.34,而经不同浓度的盐酸普鲁卡因作用48h后细胞ID4蛋白的相对表达量分别为0.44、0.56、1.01,各浓度组与对照组之间及各浓度组之间比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论:(1)盐酸普鲁卡因能够抑制体外培养的HL-60细胞增殖,且在2-6mmol/L范围内呈剂量依赖性,在24-72h范围内呈时间依赖性。(2)盐酸普鲁卡因可逆转ID4基因启动子区域CPG岛的甲基化并恢复基因活性,从而上调ID4基因mRNA和蛋白的表达,并在2-6mmol/L范围内呈剂量依赖性。(3)盐酸普鲁卡因的去甲基化作用可能是其抑制白血病HL-60细胞增殖的重要分子机制之一。
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.71

【参考文献】