MiR-192通过靶向ERCC3和ERCC4蛋白表达逆转胃癌细胞顺铂耐药性的研究

发布时间：2017-12-26 09:11

本文关键词：MiR-192通过靶向ERCC3和ERCC4蛋白表达逆转胃癌细胞顺铂耐药性的研究　出处：《安徽医科大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：研究目的胃的恶性肿瘤是临床诊断中一种常见的疾病,胃癌早期无明显症状,发现时往往为中晚期,而化疗是中晚期患者必不可少的。在胃癌化疗药物中,铂类是基础且重要的一种;然而,铂类原发或继发耐药是导致胃癌治疗失败的重要原因,探讨耐药机制、逆转铂类耐药是目前研究热点。研究表明:核苷酸切除修复(NER)是顺铂获得性耐药性的重要原因之一;而mi RNA的表达异常(微RNA)可以通过多种细胞信号传导途径调节胃癌细胞的顺铂耐药性。近期有研究显示mi R-192在Hep G2.2.15细胞中可以通过靶向抑制核苷酸切除修复途径中的ERCC3、ERCC4的表达增强对顺铂的敏感性。提示mi RNA-192也许可以作为肝癌的治疗靶标;而mi RNA-192在胃癌细胞中是否可以通过核苷酸切除修复途径调控顺铂耐药性还不清楚,值得探讨。方法采用彗星实验的方法检测人胃癌细胞SGC-7901与人胃癌细胞顺铂耐药细胞株SGC-7901/DDP的DNA损伤修复的能力,观察SCGE检测图像的尾长以评定DNA的修复能力。采用real-time PCR检测SGC-7901和SGC-7901/DDP mi R-192的表达水平,利用脂质体Lipofectamine 2000将成熟的mi R-192的阻遏物inhibitor、模拟物mimic及阴性对照组negative control RNA分别转染至SGC-7901和SGC-7901/DDP细胞,用Western blot检测转染后的SGC-7901和SGC-7901/DDP中的ERCC3、ERCC4蛋白的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡。采用细胞划痕检测SGC-7901/DDP和SGC-7901的迁移能力。结果人胃腺癌SGC-7901/DDP较SGC-7901的SCGE图像的尾长短,SGC-7901/DDP的DNA损伤修复能力比SGC-7901强。mi R-192在SGC-7901中表达较SGC-7901/DDP增高;分别将mi R-192的mimics和inhibitor转染入SGC-7901/DDP和SGC-7901中,与空白组和阴性对照组比较ERCC3和ERCC4的蛋白表达量分别降低和增高,而其细胞凋亡率则分别增高和降低。通过用细胞划痕的方法观测到SGC-7901/DDP较SGC-7901的迁移能力变差。结论mi R-192通过上调NER途径中的ERCC3和ERCC4表达,增强胃癌细胞的DNA损伤修复能力,从而增加顺铂的耐药性。SGC-7901/DDP细胞的迁移能力较其亲本细胞减弱。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2

【参考文献】